[发明专利]控制流式细胞计型测量系统的一个或多个参数的方法

说明书

本发明专利申请是国际申请号为PCT/US2004/026225，国际申请日为2004年08月13日，进入中国国家阶段的申请号为200480023013.5，名称为“控制流式细胞计型测量系统的一个或多个参数的方法”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明大致涉及用于控制流式细胞计型测量系统的一个或多个参数的方法。某些实施例涉及包括基于参数监视而实时地改变流式细胞计型测量系统的一个或多个参数的方法。

背景技术

以下的说明和范例并不因其包含于该部分之内而被认为是现有技术。

通常，流式细胞计在激光激发的聚苯乙烯小珠或者细胞线性地通过流动室的时候提供对其荧光强度的测量。不过，流式细胞计同样可以被用于提供对其它粒子的一个或多个特性的测量。某些系统被配置为用于测量由粒子所散射的与激发源成90°或者180°的光的级别，两个或更多个荧光测量被用于确定分类，也就是粒子的“身份”，被称为“指示器”(reporter)的另外的荧光测量往往被用于量化所关注的化学反应。各荧光测量是在不同的波长下作出的。

由于流式细胞计型测量仪器的测量能力已有所改进，流式细胞计可以提供有用的测量的应用领域大大地增加了。例如，对于诸如生物化验(例如，置换或竞争化验、非竞争化验、酶化验)、核酸分析、以及组合化学等应用，流式细胞计已经变得越来越有助于提供数据。特别是，由于进行化验的速度(特别是与其他化验方法(例如常规的酶联免疫吸附分析“ELISA”形式)相比较)的原因，流式细胞计越来越普及。

在通常环境下，为了确保精确可靠的化验结果，作为准备仪器以用于适当的用途和测量的一个或多个初始步骤，进行流式细胞计的校准。此外，除非每个流式细胞计的荧光通道都被校准为进行相同的读取，否则对于样本间的变化源，就没有 保证。如果没有采用完整而稳固的校准方法的话，很有可能同一个仪器在不同的几天里对同一个样本给出不同的读取结果。类似地，如果任意两个仪器即使在被正确地设置的前提下仍然不能保证给出相同的结果，尽管流式细胞计可能对样本中的细胞进行识别和区分的测量效果要好一些，但其作为医疗仪器的用途可能是不大的。

因此，已经开发了许多不同的用于校准流式细胞计的方法。起先，进行了有效的研究，开发出降低在校准时操作者的涉及程度的方法，从而提高了校准的精度。这一成果很大程度上使得流式细胞计的校准中的很多步骤实现了自动化。此外，进行了有效的研究以在其它方面提高校准的精度。例如，该成果已导致校准中的进步，诸如使用具有统一而恒定的特性的校准标准。特别是，由于生物样本的特性会随时间而变化，用于流式细胞计的生物校准标准基本上被具有更加稳定的特性的综合校准标准(例如，聚合微球体或粒子)所取代。此外，通常情况下，校准微球体具有与测试微球体的特性基本相似(即，尽可能地相近)的特性(例如，尺度、体积、表面特性、粒度特性、折射率、荧光性等)。人们确信，通过将对与在测试中预期的值尽可能接近的值进行校准，此类校准微球体提高了流式细胞计的精度。

改进流式细胞计的校准的努力同时也导致了与校准有关的流式细胞计的参数的数量的增加。例如，流式细胞计测量系统的激光激发、探测器、以及电子会随时间变化，从而影响最终测量结果。因此，流式细胞计的这些参数，以及在某些场合下的其它参数，往往与校准方法有关。

其它的一些更加难以控制的参数同样影响流式细胞计的测量。样本速度就是一个这样的参数。Ortyn等人的编号为6,532,061美国专利就描述了一个用于测量样本速度的方法的例子，该专利通过被引用而结合于此，如同在这里完整提出那样。在该方法中，对象夹带在流过感应或者测量空间的液体流中。在这些实施例的每一个中，具有大致统一的节距的光栅被用于调制从移动的对象接收到的光。该调制光被转换为电信号，电信号被数字化，然后进行快速傅利叶变换(FFT)以确定对象的速度。然而，Ortyn等人的用于测量样本速度的方法和系统有一些缺陷。例如，这些方法需要相当复杂的光栅和软件。此外，由于光栅所要求的精密度以及其制造的复杂性，光栅可能相当昂贵。而且，由于诸如移动的对象造成所检测的光的光学畸变，可能会导致样本速度测量不那么精确。