[发明专利]一种天然产物鬼臼毒素的制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种天然产物鬼臼毒素的制备方法，尤其是一种采用超临界CO₂萃取技术提取和中压氧化铝柱层析制备鬼臼毒素的方法。

背景技术：

超临界二氧化碳萃取分离过程的原理是利用超临界二氧化碳对某些特殊天然产物具有特殊溶解作用，利用超临界二氧化碳的溶解能力与其密度的关系，即利用压力和对超临界二氧化碳溶解能力的影响而进行的。在超临界状态下，将超临界二氧化碳与待分离的物质接触，使其有选择性地把极性大小、沸点高低和分子量大小的成分依次萃取出来。当然，对应各压力范围所得到的萃取物不可能是单一的，但可以控制条件得到最佳比例的混合成分，然后借助减压、升温的方法使超临界流体变成普通气体，被萃取物质则完全或基本析出，从而达到分离提纯的目的。是现有比较环保的提取方法。

鬼臼毒素

化学名称：5R-5，8，8a，9-四氢-9-羟-5-(3，4，5-三甲氧苯基)呋喃(3′，4′：6，7)萘并-[2，3-d]-1，3-间二氧杂环烯-6(5aH)-酮。

分子量：414.41

物理性质：白色针状结晶粉末。易溶于氯仿、丙酮、乙酸乙酯和苯，可溶于乙醇、乙醚。

鬼臼毒素应用于尖锐湿疣、多发性浅表性上皮瘤病、前上皮瘤性角化病、幼年喉头乳头瘤、疣(寻常疣、丝状疣)的治疗。鬼臼毒素能有效抑制疱疹病毒，抑制细胞中期的有丝分裂，用于病毒性性病。将98％以上鬼臼毒素制成0.5％的酊剂用于尖锐湿疣疗效显著。

鬼臼毒素属于木质素类中环木质素内酯，现有提取方法多是传统工艺，有机试剂用量大，污染严重，工艺流程有：乙醇或甲醇提取，浓缩后萃取，方法结晶或柱层析。相关文献如下：

温普红发表的“高纯鬼臼毒素制备新工艺”(《精细化》2001年10月第18卷第10期)，该文献工艺路线为：以桃儿七为原料，甲醇作溶剂，7℃回流提取3次，每次2所得浸膏用苯在8℃加热回流溶解，过滤、浓缩、放置结晶，得浅黄色粗品。用无水乙醇溶解粗品，经括性炭脱色后，浓缩成树脂状，用苯悬浮溶解，弃击不溶物。采用二步结晶法，先用苯作溶剂，除去绝大部分杂质后再用苯-乙醇为溶剂重结晶，1℃烘干2h，即得精品鬼臼毒索，其质量分数＞96％，产率为1.7％。

苏薇等发放表的“植物桃耳七中鬼臼毒素的提取及HPLC分析”(《中国医药工业杂志》)，该文献采用两种方法，(1)化学提取法：取桃耳七粉末，用95％乙醇反复渗漉提取，浓缩提取液，冷水沉淀得桃耳七树脂约100g(产率10％)。将100g树脂用氯仿溶解、过滤，蒸除氯仿后固体部分用乙醇溶解，加入等体积苯，放置晶析出，收率约20％，HPLC分析纯度约80％。(2)柱层析分离与纯化：层析用中性氧化铝(100～200目)干法装柱。取粗品20g，加无水乙醇40ml溶解后拌人少量氧化铝，室温挥发尽乙醇后加至柱顶，用少量氧化铝封顶。以乙醇-苯溶液为流动相洗脱。收集洗脱液每流份50ml，总计1000ml蒸干，将其溶于乙醇100ml，过滤，加入苯100ml，并不时振摇，放置有结晶析出，12h后滤集结晶，苯洗，重复结晶3次。减压干燥后得白色结晶粉末14g，产率约80％，总收率约1.4％。

专利(申请号ZL200410052833.9)“一种从桃儿七中制备鬼臼毒素的改进工艺”，该专利采用的工艺是溶剂结晶法和减压柱层析法。

专利(申请号200910047696.2)“一种从桃儿七中制备高纯度鬼臼毒素的方法”，该专利工艺路线是醇类提取-萃取-高压柱层析。

发明内容：

本发明要解决的技术问题是提供一种鬼臼毒素的制备新方法。该方法采用超临界萃取，能够提高鬼臼毒素的收率，减少纯化步骤，减少毒性试剂用量。

为了解决上述技术问题，本发明提取技术方案如下：

一种天然产物鬼臼毒素的制备方法，其特征在于包含以下步骤：

1)超临界CO₂萃取：将小檗科植物桃儿七根茎去杂干燥粉碎40-80目，投入萃取釜中，调试萃取釜，分离釜、加温装置和制冷装置正常工作，打开压缩泵加压为41-43MPa，泵入液体CO₂和氯仿夹带剂提取鬼臼毒素，从分离釜中解析萃取物，得鬼臼毒素粗品；

2)中压氧化铝柱层析：将上述鬼臼毒素粗品用3-6倍量去离子水回流溶解，弃水层，加入氯仿溶解，滤过加入中压氧化铝柱，石油醚-甲醇氯仿梯度洗脱，液相监测，收集高浓度流分，浓缩至原体积1/3-1/5，冷藏结晶；