[发明专利]一种多羟基甾醇衍生物及其制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术，具体的说是一种多羟基甾醇衍生物及其制备和应用。

背景技术

真菌是具有真核和细胞壁的异养生物。种属很多，已报道的属达1万以上，种超过10万个。其营养体除少数低等类型为单细胞外，大多是由纤细管状菌丝构成的菌丝体。在报道的文献中，很多真菌是病原微生物。如：黑曲霉Aspergillus niger能引起水分较高粮食的霉变，黄曲霉Aspergillus flavus能引起幼蚕期的一些重要疾病等等。目前已有文献报道甾醇衍生物的抗真菌活性(Gallimore W A et al.，J.Nat.Prod.，2001，64，741-744；Bruno I et al.，J.Nat.Prod.，1993，56，1057-1064；Chludil H D et al.，J.Nat.Prod.，2005，68，1279-1283)。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种具有抗真菌活性的多羟基甾醇衍生物，及其提取、制备该衍生物的方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种多羟基甾醇衍生物：所述多羟基甾醇衍生物如式A所示：

制备方法，按如下步骤：

1)将真菌产黄青霉EN-24S于PDA以20-35℃培养4-7天作为菌种；

2)将上述菌种接种于固体培养基中，以20-35℃发酵培养30-35天；所得发酵产物用过量的乙酸乙酯浸泡2-3次，而后浓缩蒸干得总提取物；

3)将上述所得总提取物用氯仿-甲醇溶解，然后用硅胶柱进行色谱分离，先经石油醚-乙酸乙酯洗脱后再由氯仿-甲醇洗脱；

4)收集上述由氯仿-甲醇体积比20∶1至10∶1的梯度洗脱下的组分，将洗脱组分再由硅胶柱层析，收集洗脱液体积比10∶1梯度的洗脱组分，纯化后即为式A化合物。

所述PDA培养基成分为：陈海水配制的20％的马铃薯浸出液1000mL、葡萄糖20g和琼脂20g，PH 6.5-7.0。所述陈海水配制的20％的马铃薯浸出液1000mL为每200g马铃薯加入1000mL海水。所述固体培养基的组成为：大米100g，陈海水100mL，蛋白胨0.6g。所述步骤3)中石油醚-乙酸乙酯梯度为1∶0至0∶1；氯仿-甲醇梯度为20∶1至1∶1。所述步骤4)再次硅胶柱层析是的洗脱液为氯仿-甲醇，梯度为20∶1至10∶1；所述步骤4)纯化为将洗脱下组分用C-18反相柱纯化，洗脱液为体积比为5∶1的甲醇-水，即得纯化后式A所示化合物。

多羟基甾醇衍生物的应用：所述式A所示多羟基甾醇衍生物具有抑制真菌的作用。所述式A所示多羟基甾醇衍生物具有抑制黑曲霉Aspergillus niger的作用。所述式A所示多羟基甾醇衍生物可作为制备抗真菌的药物。

本发明化合物多羟基甾醇衍生物即16β-乙酰氧基-3β，6β，7β，11β-四羟基-麦角甾-22-烯，英文名为16β-acetoxy-3β，6β，7β，11β-tetrahydroxy-ergost-22-en能够有效抑制黑曲霉Aspergillus niger的生长，采用滤纸片法抗菌实验发现，其对黑曲霉Aspergillus niger的抑菌圈直径为18mm，表明该化合物可用作制备抗真菌的药物。

本发明所具有的优点：

1.本发明制备所得多羟基甾醇衍生物可以作为具有抗真菌作用的新药物成分或先导化合物。

2.本发明制备所得多羟基甾醇衍生物利用微生物进行发酵生产，具有操作工艺简单，生产周期短、产品成本低的特点。

3.本发明利用微生物发酵法制备抗真菌化合物对环境无污染。

具体实施方式

通过下面给出的具体实施例可进一步了解本发明，但它不是对本发明的限定。

实施例1多羟基甾醇衍生物如式A所示，

式A化合物的制备：

1)将真菌产黄青霉EN-24S培养于PDA(potato dextrose agar)培养基中，将培养基配制成平板，然后将保种管斜面上的菌株挑入平板，以28℃培养4-7天，作为下一步培养的菌种，待用；所述PDA培养基组成为：用陈海水配制的200g的马铃薯浸出液1000mL，葡萄糖20g，琼脂20g，PH6.5-7.0。所述陈海水配制的20％的马铃薯浸出液1000mL为每200g马铃薯加入1000mL海水。陈海水为自然海水经沉降、过滤而得。