[发明专利]一种核酸检测方法及其专用试剂盒

权利要求书

1.一种核酸检测的试剂盒，包括：

捕获探针，所述捕获探针包括由20-50个核苷酸组成的单链核酸片段A，所述单链核酸片段A与待测核酸片段的区域片段A’完全反向互补或完全相同，所述单链核酸片段A的3’末端是所述捕获探针的3’末端；

和杂交探针，所述杂交探针包括由20-30个核苷酸组成的单链核酸片段B，所述单链核酸片段B与待测核酸片段的区域片段B’完全反向互补或完全相同，所述单链核酸片段B的5’末端是所述杂交探针的5’末端；

所述单链核酸片段A的3’末端有羟基，所述单链核酸片段B的5’末端有磷酸基团；所述待测核酸片段包括自上游至下游依次连接的区域片段A’和区域片段B’。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述捕获探针还包括连接在单链核酸片段A的5’末端的0-30个T；优选是10个T。

3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述捕获探针的5’末端经氨基修饰。

4.如权利要求1-3中任一所述的试剂盒，其特征在于：杂交探针的3’末端连有探针标记物，所述探针标记物优选是荧光素。

5.如权利要求1-3中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括标记探针，所述标记探针包括带有探针标记物的单链的通用片段C，所述通用片段C的3’末端是所述标记探针的3’末端，所述探针标记物优选是荧光素；

所述杂交探针还包括连接在所述单链核酸片段B的3’末端的通用片段B；

所述通用片段C与所述通用片段B完全反向互补。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述通用片段B是与所述捕获探针以及所述待测核酸片段均不杂交的片段；优选是序列表中序列2所示的20个核苷酸组成的片段。

7.一种核酸检测的方法，包括如下步骤：

1)将权利要求1-6中任一所述的试剂盒中的捕获探针制成基因芯片，然后将待测核酸片段与所述基因芯片进行第一次杂交；

2)在步骤1)的基础上，将所述试剂盒中的杂交探针加到所述基因芯片上进行第二次杂交；

3)在步骤2)的基础上，将所述捕获探针单链核酸片段A的3’末端羟基与所述杂交探针单链核酸片段B的5’末端磷酸基团在连接酶的作用下形成稳定化学键，从而所述捕获探针与所述杂交探针连接，得到探针连接物；

4)在步骤3)的基础上，针对探针连接物上进行检测。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于：步骤2)中，所述杂交探针是权利要求4中所述的杂交探针；步骤4)中，所述针对探针连接物进行检测为利用芯片扫描仪针对权利要求4所述的荧光素进行扫描，得到荧光信号。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于：步骤2)中，所述杂交探针是权利要求5中所述的杂交探针；步骤4)中，所述针对探针连接物进行检测包括如下步骤：在步骤3)的基础上，往所述基因芯片中加入权利要求5或6所述的标记探针进行显色杂交，然后利用芯片扫描仪针对权利要求5或6所述的荧光素进行扫描，得到荧光信号。