[发明专利]超灵敏量子点微球免疫层析试纸条快速检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测方法，具体地说是一种超灵敏量子点微球免疫层析试纸条快速检测方法。

背景技术

免疫层析试纸条检测是一种快速、简便、灵敏、直观、价格低廉，可根据需要随时进行现场检测的方法。具有其它检测方法例如气相色谱法、高效液相色谱法、气质联用色谱法、液质联用色谱法、毛细管电泳等仪器检测方法不具备的优点。在检测技术中处于重要的地位，也是对传统检测和仪器检测的良好补充。尤其在科学技术发展，生活水平提高的当代，人类重大疾病，环境污染，食品安全等问题日益受到极大的关注，免疫层析检测技术更加具有重要的作用。

目前，免疫层析产品主要为胶体金免疫层析试纸条，其最早应用于医学检验，在早孕检测中应用取得了极大的成功；随后在各个领域迅速被扩大应用。在毒品检测、环境检测、食品安全检测领域得到了迅速的推广和应用。现有免疫层析检测技术的缺点是：由于食品安全检测、农药、兽药残留检测限度要求极度苛刻；同时食品类物质如肉类、禽类、果蔬、谷物等成分复杂，前处理难度大；胶体金免疫层析检测灵敏度往往无法满足人们的要求。因此发明一种灵敏度高、检测简便、直观、价格低廉的免疫层析检测方法是十分重要的。

量子点是近20年来发展起来的半导体纳米晶材料，它具有如下特点：1、不同粒径大小的量子点具有不同的颜色，激发量子点的波长范围很宽，且连续分布，可以用同一波长的光激发不同大小的量子点而获得多种颜色标记，是一类理想的荧光探针。2、被激发的量子点所发射的荧光谱峰狭窄而对称，同时使用不同光谱特征的量子点发射光谱不出现交叠；使生物分子的定量检测和多组分检测变得容易。3、量子点探针的荧光强度比最常用的罗丹明6G染料高20倍；稳定性是罗丹明6G的100倍以上；可以经受反复多次激发，不易发生荧光淬灭，光化学稳定性高，不易分解。

由于半导体纳米晶材料具有这些优良性能使得它为检测与诊断提供了有力工具。近年来从细胞标记应用已逐渐开始向多个领域的检测与诊断方向发展。由于量子点一般粒径微小，只有1-10nm左右，单个量子点发光强度有限，单个量子点与抗体相偶联，在实际应用中灵敏度远远不够。因此想要得到更高的发光强度，不仅是要提高单个量子点的荧光量子产率，更重要的是将多个量子点形成尺寸较大的微球，使得每个球体上具有大量的量子点；同时不能造成荧光强度的猝灭。将量子点包裹成球通常的做法是用反相微乳液法或发明的法，将多个量子点包裹进二氧化硅纳米粒子中。应用这种方法得到的硅包量子点微球因为静电排斥只能包裹少量量子点，同时因为反应中试剂的作用，造成荧光强度很大的猝灭，无法得到较高的灵敏度。

中国专利200610024086.7、200810045548.2、200810041133.8、200810227473.X、200810186010.3都不同程度的涉及量子点免疫层析试纸条检测方法，由于选用的都为单个量子点或者核壳型量子点，即使应用包裹技术，灵敏度也受到很大的限制。

为了提供一种灵敏度高、检测简便、直观、价格低廉、应用广泛的免疫层析检测方法，发明一种超灵敏量子点微球免疫层析试纸条快速检测方法，对于人类重大疾病，环境污染，食品安全的检测是十分必要的。

发明内容

本发明的目的是提供一种灵敏度高、检测简便、直观、价格低廉、应用广泛的超灵敏量子点微球免疫层析试纸条快速检测方法。

本发明的目的是这样实现的：

一种超灵敏量子点微球免疫层析试纸条快速检测方法，包括以下步骤：

(1)制备氨基化二氧化硅纳米粒子：

A、由表面活性剂、油相、水相、助剂配制反相微乳液体系；在氨水为催化剂的情况下水解正硅酸乙酯制备小粒径二氧化硅纳米粒子；

B、大粒径的二氧化硅纳米粒子可用法在乙醇/水溶液中用氨水催化TEOS合成；

C、将二氧化硅纳米粒子用硅烷偶联剂进行氨基化改性；得氨基化二氧化硅纳米粒子；

(2)将氨基化二氧化硅纳米粒子与抗体在缩合剂的作用下37℃孵育1-10h，高速离心1-4次除去未结合抗体与缩合剂；

(3)将离心后的沉淀物复溶，加入缩合剂及羧基化水溶性量子点，37℃下孵育1-10h，高速离心除去游离的量子点与缩合剂；制得二氧化硅/量子点复合微球探针，用稀释液复溶，放入冰箱4℃条件下保存备用；

(4)将划有二抗与包被抗原或相应抗体的硝酸纤维素膜、吸水垫、喷有量子点微球探针的玻璃纤维素膜、玻纤膜或聚酯膜样品垫组装在背板上，组建免疫层析试纸条体系；