[发明专利]超灵敏量子点微球免疫层析试纸条快速检测方法

权利要求书

1.一种超灵敏量子点微球免疫层析试纸条快速检测方法，包括以下步骤：

(1)制备氨基化二氧化硅纳米粒子：

A、由表面活性剂、油相、水相、助剂配制反相微乳液体系；在氨水为催化剂的情况下水解正硅酸乙酯制备小粒径二氧化硅纳米粒子；

B、大粒径的二氧化硅纳米粒子可用法在乙醇/水溶液中用氨水催化TEOS合成；

C、将二氧化硅纳米粒子用硅烷偶联剂进行氨基化改性；得氨基化二氧化硅纳米粒子；

(2)将氨基化二氧化硅纳米粒子与抗体在缩合剂的作用下37℃孵育1-10h，高速离心1-4次除去未结合抗体与缩合剂；

(3)将离心后的沉淀物复溶，加入缩合剂及羧基化水溶性量子点，37℃下孵育1-10h，高速离心除去游离的量子点与缩合剂；制得二氧化硅/量子点复合微球探针，用稀释液复溶，放入冰箱4℃条件下保存备用；

(4)将划有二抗与包被抗原的硝酸纤维素膜、吸水垫、喷有量子点微球探针的玻璃纤维素膜、玻纤膜或聚酯膜样品垫组装在背板上，组建免疫层析试纸条体系；

(5)对于检测灵敏度要求高的检测物，增加量子点微球探针与样品的孵育步骤，增加反应时间：移取量子点微球探针于96孔板小孔中，冷冻干燥或低温真空干燥后密闭保存，在检测时滴加样品处理液于小孔中进行复溶，静置反应2-10分钟；吸取；加入没有结合垫的免疫层析试纸条中检测；

(6)半定量与定量检测：

A、半定量检测：滴加样品后于紫外灯下观测条带显色情况；

B、定量检测：制作具有激发光源、信号采集、光信号数字转换部件与软件的定量检测平台。

2.根据权利要求1所述的超灵敏量子点微球免疫层析试纸条快速检测方法，其特征在于：步骤(1)制备氨基化二氧化硅纳米粒子A与C两个步骤结合的方法也可另选用一步法：

二氧化硅纳米粒子在反相微乳液中制备结束以后，直接在体系中加入氨基化硅烷偶联剂氨基化修饰。

3.根据权利要求1所述的超灵敏量子点微球免疫层析试纸条快速检测方法，其特征在于：步骤(2)所述缩合剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺的一种或几种混合。

4.根据权利要求1所述的超灵敏量子点微球免疫层析试纸条快速检测方法，其特征在于：步骤(3)所述量子点是水溶性表面具有羧基的量子点或核壳结构量子点的一种；可以直接在水相中合成，或者油相合成后进行水相改性。

5.根据权利要求1所述的超灵敏量子点微球免疫层析试纸条快速检测方法，其特征在于：步骤(3)所述稀释液为含牛血清白蛋白、蔗糖、叠氮钠、聚乙二醇20000、吐温-20等物质的缓冲溶液。

6.根据权利要求1所述的超灵敏量子点微球免疫层析试纸条快速检测方法，其特征在于：量子点微球探针可喷在玻璃纤维素膜上作为结合垫组装在试剂条上；也可直接移取一定量探针于可拆卸96孔板单个孔中，干燥密封保存，检测时用样品或样品处理液复溶并孵育。

7.根据权利要求1所述的超灵敏量子点微球免疫层析试纸条快速检测方法，其特征在于：

A、检测物质为大分子物质时，采用双抗体夹心法，检测线的组成物为检测物的另一抗体；

B、检测物质为小分子物质时，采用竞争法，检测线的组成物为检测物的包被抗原。

8.根据权利要求1所述的超灵敏量子点微球免疫层析试纸条快速检测方法，其特征在于：免疫层析试纸条检测线为1条-3条；多残留检测，每种残留物对应抗体分别用不同荧光颜色的量子点微球进行标记。