[发明专利]一种马来酸桂哌齐特中氯乙酰吡咯啶哌嗪的测定方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种化学药物的检测方法，特别是一种马来酸桂哌齐特的高效液相色谱测定方法。

背景技术：

马来酸桂哌齐特，化学名为：(E)-1-{4-[〔3′、4′、5′-三甲氧基肉桂酰基)]-1-哌嗪}乙酰吡咯啶顺丁烯二酸盐，英文名为Cinepazide Maleate。是一种具有多种药物作用的新药，疗效确切，不良反应小，具有扩张血管和促进神经细胞营养代谢的双重作用，是一种末梢血管扩张剂，临床上用于治疗心脑血管病。

马来酸桂哌齐特的化学结构式如下：

马来酸桂哌齐特的合成可以采用以下方法：

以3，4，5-三甲氧基肉桂酸为原料，与氯乙酰吡咯啶哌嗪反应生成桂哌齐特游离碱，再与马来酸成盐，在该合成方法中氯乙酰吡咯啶哌嗪作为原料可能存留在最终产物中，所以马来酸桂哌齐特产品中可能带有氯乙酰吡咯啶哌嗪杂质。

氯乙酰吡咯啶哌嗪(简称B+C)结构式如下：

现有国家标准中采用的方法，B+C色谱峰与马来酸桂哌齐特中的马来酸的色谱峰保留时间相同，无法对马来酸桂哌齐特产品中残存或产生的B+C有效检出，进行控制。我们经过研究，采用本发明的方法可以有效检出产品中可能残留的B+C。

为此，本发明公开了一种马来酸桂哌齐特中氯乙酰吡咯啶哌嗪(以下简称B+C)的分离测定方法，本发明采用高效液相色谱法，用两种色谱柱分离测定马来酸桂哌齐特中含有的B+C。本方法能准确测定B+C的含量，有效控制马来酸桂哌齐特的质量，从而确保了药品的安全性、有效性和可靠性，具有实际意义。

发明内容：

本发明提供一种马来酸桂哌齐特产品中作为杂质的氯乙酰吡咯啶哌嗪的分离测定方法。

本发明的测定方法1，其特征在于选用亲水作用色谱(Hydrophilic InteractionChromatography，HILIC)色谱柱，采用一～四根串联，优选一～两根串联。以甲醇、乙腈或其混合物为有机相，与水相混合的溶剂作为流动相。甲醇与水相的比例为：90～10∶10～90。优选：40～10∶60～90。最优选为10∶90。或有机相为乙腈，与水相混合的溶剂作为流动相，乙腈与水相的比例为：90～10∶10～90。优选：40～10∶60～90。最优选为10∶90。

本发明的测定方法2，其特征在于选用型号为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以甲醇为有机相，与水相混合的溶剂作为流动相。甲醇与水相的比例为：90～10∶10～90。优选：40～20∶60～80。最优选为20∶80。

本发明的测定方法，其特征是水相可以为磷酸盐溶液，所述磷酸盐选自磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸氢二铵中的一种或其混合物。所述磷酸盐溶液为磷酸氢二钠溶液，其浓度为0.05mol/L。优选的所述磷酸盐溶液为0.05mol/L磷酸氢二钠溶液，用磷酸调pH值为3.0～6.0。最优选的所述磷酸盐溶液为0.05mol/L磷酸氢二钠溶液。

本发明的测定方法，其特征是检测波长为200nm～400nm，优选的检测波长为210nm。

本发明的测定方法，其特征是柱温为10～50℃。优选的柱温为25℃。

本发明的测定方法，其特征是流速为0.1ml/min～5ml/min。优选的流速为0.5ml/min～1.0ml/min。

本发明的测定方法，其特征是供试品溶液为每1ml约含马来酸桂哌齐特0.5～10mg的溶液。优选0.5mg；B+C对照品溶液为每1ml约含0.5～10μg的溶液。优选0.5～2.5μg。

本发明的测定方法，其特征是精密量取供试品溶液、对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，按外标法以峰面积(或峰高)或峰面积归一化法计算B+C的含量。

本发明的测定方法，优选采用以下步骤：取马来酸桂哌齐特适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml约含0.5mg的溶液，作为供试品溶液；流速为1.0ml/min，检测波长210nm。取供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，完成马来酸桂哌齐特与B+C的分离测定。

因此，本发明的测定方法包括以下三种优选的方法：

方法1、采用亲水作用色谱(Hydrophilic Interaction Chromatography，HILIC)色谱柱，(5μm，100，4.6×250mm)，以乙腈-0.05mol/L磷酸氢二钠缓冲液(用磷酸调节pH至4.5)(10∶90)为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为210nm。