[发明专利]高纯度连翘苷的分离制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种连翘苷的分离制备方法，尤其涉及一种应用高速逆流色谱法(HSCCC)分离制备高纯度连翘苷的方法。

技术背景

连翘(Forsythia suspense(thumb.)Vah1)为木犀科连翘属植物。始载自《神农本草经》，其性苦，微寒。归肺、心、小肠经。功能清热解毒，消肿散结。用于痈疽，瘰疬，乳痈，丹毒，风热感冒，温病初起，温热入营，高热烦渴，神昏发斑，热淋尿闭。

连翘苷是一种木脂素单糖苷，是由连翘苷元与葡萄糖组成，在连翘药材中含量约为0.15％，是连翘药材的主要指标性成分。连翘苷具有抗氧化和降血脂及减肥的活性，对于预防动脉粥样硬化和冠心病等疾病具有一定的作用，也是连翘药材的活性成分之一。连翘苷结构式如下所示：

高速逆流色谱技术(High-speed Counter-current Chromatography，HSCCC)是20世纪90年代发展起来的一种新型液-液色谱分离方法。其原理是利用螺旋柱在行星运动时产生的离心力，使互不相溶的两相不断混合，同时保留其中的一相(固体相)，利用恒流泵连续输入另一相(流动相)，随流动相进入螺旋柱的溶质在两相之间反复分配，按分配系数的次序，被依次洗脱。在流动相中分配比例大的先被洗脱，反之，在固体相中分配比例大的后被洗脱。不同于传统液相色谱法，HSCCC分析方法不使用固相载体，因而避免了有效成分被固相载体的不可逆吸附和峰形拖尾等缺点；样品粗提物可直接进样分离，可以高效、快速和大制备量分离，分离纯化与制备可同步完成，有机溶剂消耗少，无损失、无污染。基于以上优点，HSCCC色谱仪无论是作为分析型仪器还是制备型仪器，在天然产物上具有广阔的开发前景和实际的应用意义，它可以从复杂的天然粗制品中提取不同特性的有效成分，为天然药物的发展提供了有利条件。

在本发明之前，还没出现应用高速逆流色谱法(HSCCC)分离出高纯度连翘苷的公开报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种高纯度连翘苷的高速逆流色谱分离制备方法。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：

一种高纯度连翘苷的分离制备方法，该方法采用高速逆流色谱技术，包括如下步骤：

(1)制备连翘粗提物作为进样物；

(2)配制构成固定相、流动相的两相溶剂体系，该溶剂体系由四个组分A，B，C，D构成，A组分为正构烷烃、环烷烃或卤代烷烃，B组分为卤代烷烃，C组分为脂肪醇，D组分为水，将该溶剂体系混匀静置分层后，以上相为固定相，下相为流动相；

(3)使高速逆流色谱仪分离柱中充满固定相，再使主机转动，然后将流动相泵入柱内；或者将固定相和流动相同时泵入柱内，再使主机转动；

(4)由进样阀进样，根据紫外检测吸收峰接收目标组分，经分离后可得到连翘苷。

步骤(2)中，所述的正构烷烃为正己烷；所述的环烷烃为环己烷；

所述的卤代烷烃为四氯化碳或氯仿；所述的脂肪醇为甲醇或乙醇。优选地，

所述的溶剂体系由以下A，B，C，D组分组成：所述的A组分为正己烷、环己烷或四氯化碳，所述的B组分为氯仿，所述的C组分为甲醇，所述的D组分为水。

步骤(2)中，所述的溶剂体系中A，B，C，D四项组分的体积比依次为(0-2)∶(1-4)∶(1-4)∶(1-3)，例如0.2∶3.8∶4∶2或2∶3∶3∶2等。当其中的A组分比例变为0时，溶剂体系变为氯仿-甲醇-水体系。溶剂体系优选氯仿-甲醇-水体系且优选体积比为4∶3∶2，以上相为固定相，下相为流动相。

按体积比将各溶剂置于分液漏斗中，摇匀静置分层。待平衡一段时间后，将上相(固定相)和下相(流动相)分开。采用TBE-300A型高速逆流色谱仪，柱容积119ml，进样圈为10ml，purifier P-900泵，UV检测器，HX-1050恒温循环器。流动相进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为600-999rpm，以1-3mL/min的流速将流动相泵入柱内；或者固定相和流动同时泵入柱内，待溶剂充满整个柱子后，调整主机转速为600-999rpm。

主机转速越高，固定相保留率越高，但转速越高，越易产生乳化现象。当转速在800-999r/min范围内，分离效果较好，在此范围内改变转速，对结果无太大影响，故优选900r/min。