[发明专利]能同时降解果酒中苹果酸和柠檬酸菌株的筛选方法及应用

权利要求书

1.一种能同时降解果酒中苹果酸和柠檬酸菌株的筛选方法，其特征在于：降解果酒中苹果酸和柠檬酸的有效菌为伊萨酵母属(Issatchenkia)的陆生伊萨酵母(Issatchenkia terricola)种，具体的筛选方法如下：采集葡萄园土壤2g定量加到盛有100mL无菌生理盐水的三角瓶中，并加入8～12粒无菌玻璃珠，充分振荡后静置，取上清液再分别加入到以浓度为2g/L的苹果酸为唯一碳源的液体富集培养基中进行富集培养，培养条件为28℃，150r/min，摇床振荡培养，以24h为一个周期，每个周期结束后，按照以上的操作，依次将所培养的菌液转接入新鲜的富集培养基中，同时苹果酸浓度由2g/L、4g/L、6g/L、8g/L逐渐递增到10g/L；再通过初筛和复筛后选出对苹果酸具有较好降酸效果的菌株；

将筛选得到的降酸菌——陆生伊萨酵母用平板划线法进行多次分离纯化后，挑取单菌落接入到YPD斜面培养基上于28℃培养24h后4℃保存。

2.根据权利要求1所示的一种能同时降解果酒中苹果酸和柠檬酸菌株的筛选方法，其特征在于所述的初筛过程如下：在富集培养后取一定量的富集菌液，用生理盐水稀释到10^-5，选择10^-3、10^-4、10^-5稀释度，分别吸取0.5mL稀释液涂布于含酒石酸浓度为10g/L的琼脂平板培养基上，28℃恒温培养72h。将所得的典型单菌落点植于分离培养基上，相同条件下培养。

3.根据权利要求1所示的一种能同时降解果酒中苹果酸和柠檬酸菌株的筛选方法，其特征在于所述的复筛过程如下：将初筛所得到的单菌落用平板划线法进行多次分离纯化，挑取单菌落接入YEPD斜面培养基于28℃培养72h后4℃保存。

4.一种菌株——陆生伊萨酵母在降解果酒中苹果酸及柠檬酸的应用。