[发明专利]一种生物合成共轭亚油酸CLA的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物合成共轭亚油酸CLA的方法，尤其涉及一种合成脂肪酸的方法。

背景技术

自然界来源的食物成分中，共轭亚油酸CLA(Conjugated linoleic acid)是目前发现的唯一一种具有抗癌活性的天然物质。CLA是一类位置和几何异构体组成的十八碳二烯酸，即双不饱和脂肪酸成分的总称。其中最常见和含量最高的cis-9，trans-11异构体(c9t11-CLA)具有抗癌特性，能降低心血管疾病的发病率，改善免疫功能，抵抗糖尿病等；另外一种trans-10，cis-12异构体(t10c12-CLA)的含量较低，参与控制身体脂肪的沉积，减少肥胖症发生的概率，也是当前研究的热点。2008年，美国FDA颁发食品许可证，同意CLA可以作为食品添加剂使用。目前，CLA已经被许多食品和制药企业作为保健品生产并出售。

目前，商品CLA制剂主要是由亚油酸丰富的植物油类通过碱性异构化生成，主要获得的是c9t11和t10c12的CLA混合物，二者的比例一般为1∶1，这与牛奶中约80-90∶1的自然比例相差甚远；另外，碱性异构化过程中，会生成其它杂质性异构体，它们的比例甚至能够达到30％以上，这些混杂的成分被人或动物消化吸收后，容易通过花生四烯酸代谢途径衍生出多种有负面生物学效应的共轭类异构体。由此可见，作为食品添加剂的CLA，最好来自生物合成的单一组分，而不是工业合成的复杂成分.

除了部分植物种籽和猪牛羊肉含有极微量的CLA成分外，牛羊等反刍动物的乳汁是目前已知的CLA含量最高的食物类型，一升牛奶中，CLA的平均含量在1.4克左右。问题是全球牛奶产量远远不能满足市场的需求；另外，约有20％的人对牛奶过敏，他们无法利用牛奶CLA。生物学研究发现，牛奶中的c9t11-CLA异构体占整个CLA总量的80-90％之间。当瘤胃微生物将亚油酸氢化成硬脂酸时，中间产物CLA通过逃逸方式进入动物血液，然后分泌至乳汁中。

目前，还未见动物细胞或者组织中表达外源SCD基因的报道，我们不清楚异源表达SCD酶的具体功能，也不清楚异源表达的SCD酶是否能有效地生物合成CLA成分。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种合成脂肪酸的方法。

本发明提供方法，为培养重组细胞，获得脂肪酸；

所述重组细胞为将SCD1的编码基因导入宿主细胞得到的重组细胞，所述SCD1为下述1)或2)的蛋白质：

1)由序列表中的序列2所示的蛋白质，

2)将序列表中的序列2氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能由1)衍生的蛋白质。

上述序列表中的序列2由359个氨基酸残基组成。所述一个或数几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加是指不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。

所述培养的方法如下：

1)将所述重组细胞在不含反式十八碳烯酸的培养基中培养(10-14)小时，优选为10小时、12小时或14小时，

2)再在含有反式十八碳烯酸的培养基中继续培养(45-50)小时获得脂肪酸；所述培养优选为培养45、48或50小时。

所述不含反式十八碳烯酸的培养基按照如下方法配制：向DMEM培养基中添加胎牛血清，所述胎牛血清在所述不含反式十八碳烯酸的培养基中的浓度为10％(体积百分比)；

所述含有反式十八碳烯酸的培养基按照如下方法配制：向DMEM培养基中添加胎牛血清和反式十八碳烯酸，所述胎牛血清在所述含有反式十八碳烯酸的培养基中的浓度为10％(体积百分比)，所述反式十八碳烯酸在所述含有反式十八碳烯酸的培养基中的浓度为(8-12)μM，优选为8μM、10μM或12μM。

所述步骤1)和步骤2)的培养条件均为：培养温度为37℃，CO₂的含量为5％。

所述SCD1的编码基因为如下1)或2)中任一所述的DNA分子：

1)序列表中的序列1所示的DNA分子；

2)与1)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性具有相同功能的DNA分子。

所述SCD1的编码基因是通过重组表达载体导入宿主细胞。

所述宿主细胞为真核细胞，所述真核细胞优选为HEK 293细胞。