[发明专利]用于检测弓形虫的引物、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于检测弓形虫的引物，其特征在于该引物为弓形虫特异性B基因，该引物的上游引物具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；下游引物具有如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。

2.一种用于检测弓形虫的试剂盒，其特征在于包括PCR反应液、如权利要求1所述的引物和内参引物混合液、阴性对照物、阳性对照物和灭菌双蒸水。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述的内参引物的上游引物具有如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列；下游引物具有如SEQ ID No.4所示的核苷酸序列。

4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于所述的PCR反应液是包括pH 8.4的Tris-HCl40 mM，MgCl₂ 15～24 mM，KCl 50 mM，(NH₄)₂SO₄ 10 mM，dNTP 0.4mM和终浓度0.06～0.10 U/μL 的Taq DNA多聚酶的混合溶液。

5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述的PCR反应液是包括pH 8.4的Tris-HCl40 mM，MgCl₂ 20 mM，KCl 50 mM，(NH₄)₂SO₄ 10 mM，dNTP 0.4mM和终浓度0.08 U/μL的Taq DNA多聚酶的混合溶液。

6.根据权利要求2或3或5所述的试剂盒，其特征在于所述的引物和内参引物混合液是由10μM内参引物和10μM引物混合配制而成，其中内参引物/引物的体积比值范围为0.6～1.2。

7.根据权利要求2或3或5所述的试剂盒，其特征在于所述的阳性对照物为含弓形虫特异性基因的宫颈细胞DNA；阴性对照物为ddH₂O。

8.一种检测弓形虫的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）提取样本DNA；

2）使用权利要求1所述的引物或权利要求3所述的试剂盒对步骤1）得到的DNA进行PCR扩增；

3）检测步骤2）所得到的扩增产物。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述的步骤1）中的样本为人的静脉全血、或宫颈悬浮细胞及分泌物；步骤3）中的采用的检测方法为微流体芯片检测法。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

1）用权利要求1所述的引物或权利要求3所述的试剂盒对被测样本的DNA进行多重PCR扩增；被扩增的目标基因片段大小各不相同；

2）扩增产物通过微流体芯片进行检测；

3）通过对各检测峰位置的判断，确定检测到的片段的大小，从而确定被检测到的基因，判断临床样本感染的病毒类别；

4）结果判断：a）未出现任何特异性峰，说明临床样本的DNA没有提取出，检测无效；b）只出现DNA内参特异性峰，说明没有弓形虫感染；c）出现DNA内参和弓形虫B基因特异性峰，说明有弓形虫感染。