[发明专利]lspD抑制剂筛选模型及IspD抑制剂杜米芬的新用途

权利要求书

1.用于2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸胞嘧啶转移酶抑制剂筛选的试剂组，包括2-甲基-赤藓糖醇磷酸、三磷酸胞苷和2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸胞嘧啶转移酶。

2.根据权利要求1所述的试剂组，还包括酶反应缓冲液和离子试剂，其中所述离子试剂包括MgCl₂、NaF及DTT。

3.根据权利要求1所述的试剂组，还包括测定2-甲基-赤藓糖醇磷酸、三磷酸胞苷和2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸胞嘧啶转移酶反应所生成的焦磷酸的试剂，所述试剂优选为β-巯基乙醇和钼酸铵。

4.根据权利要求1所述的试剂组，其中所述2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸胞嘧啶转移酶是从能够产生2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸胞嘧啶转移酶的生物中提取获得的或者根据前述生物的基因组序列利用分子生物学方法获得的。

5.使用权利要求1-4所述的试剂组筛选2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸胞嘧啶转移酶抑制剂的方法，包括以下步骤：

a.将三磷酸胞苷、2-甲基-赤藓糖醇磷酸、2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸胞嘧啶转移酶、待筛选化合物、酶反应缓冲液和离子试剂混合，组成反应体系，孵育，同时设立阳性对照和阴性对照组；

b.测定a反应中所生成的焦磷酸的量，得出2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸胞嘧啶转移酶活性；优选为加入β-巯基乙醇和钼酸铵，孵育，检测反应体系的光吸收值，得出2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸胞嘧啶转移酶活性；

c.根据光吸收值计算待筛选化合物对2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸胞嘧啶转移酶活性的抑制率，进而得到对2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸胞嘧啶转移酶活性有抑制作用的阳性化合物。

6.根据权利要求5所述的方法，其中各化合物的反应终浓度分别为2-甲基-赤藓糖醇磷酸100μM-1mM，三磷酸胞苷100μM-1mM，2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸胞嘧啶转移酶3.85-385pmol，待筛选化合物1-100μg/ml；优选的浓度为2-甲基-赤藓糖醇磷酸250μM，三磷酸胞苷500μM，2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸胞嘧啶转移酶38.5pmol，待筛选化合物10μg/ml。

7.根据权利要求5所述的方法，其中所述阳性对照组是指反应体系中加入失活的2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸胞嘧啶转移酶，不加待筛选化合物；其中所述阴性对照组是指反应体系中不加入待筛选化合物。

8.根据权利要求5所述的方法，其中所述根据光吸收值计算抑制率的方法如式(I)所示：

9.杜米芬在体内/体外抑制分枝杆菌的用途，所述分枝杆菌优选为结核分枝杆菌，最优选为结核分枝杆菌H₃₇Rv。

10.杜米芬用于制备抗结核药物的用途。

11.2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸胞嘧啶转移酶在制备用于筛选结核抑制剂的组合物中的用途。