[发明专利]一种抗植物青枯病基因及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种抗植物青枯病基因，其DNA序列如SEQ ID NO：1所示，该基因编码的蛋白如SEQ ID NO：2所示。

2.根据权利要求1所述的抗植物青枯病基因，其特征在于所述基因是从半野生茄子E-31中扩增得到的。

3.根据权利要求1所述的抗植物青枯病基因，其特征在于所述植物为茄子。

4.权利要求1或2或3所述的抗植物青枯病基因的制备方法，其特征在于通过cDNA-AFLP差异显示法及RACE法从抗青枯病的半野生茄子E-31中克隆得到的，步骤如下：

(1)对E-31、E-32、F1和F2茄子植株进行人工抗青枯病鉴定，得到抗病植株和感病植株；

(2)分别提取上述抗病植株和感病植株的总RNA，合成cDNA；

(3)利用cDNA-AFLP差异显示法进行筛选，用序列如SEQ ID NO：3～4所述引物扩增出与抗病基因连锁的抗病基因片段，序列如SEQ ID NO：5所示；

(4)利用RACE法扩增抗青枯病基因片段的全长序列：根据步骤(3)所得抗病基因片段设计引物，扩增5’端序列，如SEQ ID NO：6所示；所述引物序列如SEQ ID NO：7～8所示；

(5)根据步骤(3)所得抗病基因片段设计引物，扩增3’端序列，如SEQID NO：9所示；所述引物序列如SEQ ID NO：10～11所示；

(6)根据扩增出的5’端序列和3’端序列进行连接，得到抗青枯病基因的全长序列。

5.权利要求1或2所述的抗植物青枯病基因在制备抗青枯病转基因植株中的应用。

6.根据权利要求5所述的抗植物青枯病基因在制备抗青枯病转基因茄子中的应用。

7.根据权利要求5所述的抗植物青枯病基因的应用，其特征在于将抗植物青枯病基因序列构建到克隆载体上，利用限制性内切酶进行双酶切，获得目的基因片段，利用内切酶双酶切植物正义表达载体，把酶切获得的基因片段和正义表达载体通过连接酶进行连接，将构建好的植物表达载体转化到农杆菌中，利用农杆菌导入法进行转化，通过筛选，得到具有抗青枯病能力的转基因植株。

8.根据权利要求7所述的抗植物青枯病基因的应用，其特征在于所述克隆载体为pMD19-T。

9.根据权利要求7所述的抗植物青枯病基因的应用，其特征在于所述限制性内切酶为sma I和sac I。