[发明专利]一种小鼠巨噬细胞的Giemsa染色方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种Giemsa的染色方法，具体涉及一种小鼠巨噬细胞的Giemsa 的染色方法。

背景技术

光学显微镜仍是目前观察细胞形态使用的最普遍和方便的工具。但大多数 细胞在可见光下几乎是透明的，不经染色在光学显微镜下无法看清结构。染色 可使细胞不同结构显示区别的颜色特征，便于直接观察细胞的生物学特征。

Giemsa染液由天青和伊红组成，细胞中的碱性物质与酸性染料伊红结合， 呈粉红色；酸性物质与碱性染料天青结合，呈紫蓝色；中性物质可与两种染料 同时结合，呈淡紫色。

Giemsa染色法能将细胞核和细胞质同时染色，操作简便快捷，但染料配制 技术和染色条件不易准确掌握。

发明内容

为克服现有技术中的不足，本发明的目的是提供一种小鼠巨噬细胞的 Giemsa染色方法，经该方法染色后的细胞，胞核和胞质界限清晰可见。

为解决上述技术问题，本发明采用了一下技术方案：

一种小鼠巨噬细胞的Giemsa染色方法，包括以下实施步骤：

1)细胞培养；

2)细胞预处理；

3)Giemsa染色；

进一步的，所述步骤1的细胞培养过程如下：将小鼠巨噬细胞用含10％FBS 的RPMI培养基于37℃、5％CO₂的条件下培养，隔日传代。

进一步的，所述步骤2的细胞预处理过程如下：将培养至对数生长期的小 鼠巨噬细胞用胰酶消化后，于含10％FBS的RPMI培养基中以1500r/min的转 速离心5min后洗涤2次，将细胞浓度调整为1×105个/ml，加入铺有小圆玻 片的24孔板中，每孔1ml，在37℃、5％CO₂的条件下平衡12h待用。

进一步的，所述步骤3的Giemsa染色过程如下：取出平衡12h后的小圆 玻片，烘干，甲醇固定3min，将Giemsa染液PH值调制到7.0-7.4之间并过滤， 过滤后的Giemsa染液对小圆玻片上的小鼠巨噬细胞进行染色，染色3min后用 1×PBS缓冲液冲洗，用吸水纸吸干后油镜下观察并摄片。

优选的，所述小圆玻片以浓盐酸、洗洁精、浓硫酸依次浸泡处理24h，每 次浸泡后用单蒸水冲洗；再用无水乙醇浸泡2h，三蒸水洗3遍后放温箱烘干； 最后高压灭菌30min后干燥保存，在使用前将处理过的小圆玻片放入24孔板 中，紫外灯灭菌30min。

本发明的有益效果是：利用本发明的Giemsa染色方法可以明显的区分出被 染色后的细胞核和细胞质。

以下结合具体实施例对本发明作进一步详细的描述。

具体实施方式

一种小鼠巨噬细胞的Giemsa染色方法：

1.材料的准备

1)小鼠巨噬细胞，由浙江大学医学院严杰教授惠赠。

2)培养基和主要液体配制

含10％FBS的RPMI 1640细胞培养基：每1000ml含有RPMI 1640 900ml， 胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)100ml，另含L-谷氨酰胺2mmol/L， 青霉素100U/ml，链霉素100U/ml；

D-Hank’s缓冲液：NaCl 8.0g，KCl 0.40g，Na2HPO4·12H2O 0.135g， KH2PO4 0.06g，NaHCO3 0.35g，pH 7.2，加双蒸水定容至1L，高压灭菌；

Giemsa染色原液：Giemsa粉0.5g，纯甘油33ml，甲醇33ml。先将Giemsa 粉置于研钵中加少量甘油，充分研磨呈无颗粒的糊状后再将全部甘油加入，放 56℃温箱中2h，加甲醇过滤后保存于棕色瓶中。染色工作液：1份原液加9 份甲醇，使用前过滤；

1×PBS缓冲液：NaCl 8.0g，KCl 0.2g，KH2PO4 0.24g，Na2HPO4 1.44g， 用HCl调至pH 7.4，加双蒸水定容至1L，高压灭菌，4℃预冷。

3)主要试剂和仪器

RPMI 1640干粉为美国Gibco公司产品；FBS购自杭州赛乐生物科技有限公 司，56℃灭活30min之后使用。胰酶细胞消化液购自杭州碧云天生物技术研 究所；