[发明专利]一种小鼠巨噬细胞的Giemsa染色方法

权利要求书

1.一种小鼠巨噬细胞的Giemsa染色方法，包括以下实施步骤：

1)细胞培养；

将小鼠巨噬细胞用含10％FBS的RPMI培养基于37℃、5％CO₂的条件下培养，隔日传代；

2)细胞预处理；

将培养至对数生长期的小鼠巨噬细胞用胰酶消化后，于含10％FBS的RPMI培养基中以1500r/min的转速离心5min后洗涤2次，将细胞浓度调整为1×105个/ml，加入铺有小圆玻片的24孔板中，每孔1ml，在37℃、5％CO₂的条件下平衡12h待用；

3)Giemsa染色；其特征在于：

所述Giemsa染色的过程如下：取出平衡12h后的小圆玻片，烘干，甲醇固定3min，将Giemsa染液pH值调制到7.0-7.4之间并过滤，过滤后的Giemsa染液对小圆玻片上的小鼠巨噬细胞进行染色，染色3min后用1×PBS缓冲液冲洗，用吸水纸吸干后油镜下观察并摄片；所述1×PBS缓冲液通过以下方法配置：NaCl8.0g，KCl0.2g，KH2PO40.24g，Na2HPO41.44g，用HCl调至pH7.4，加双蒸水定容至1L，高压灭菌，4℃预冷。

2.根据权利要求1所述的小鼠巨噬细胞的Giemsa染色方法，其特征在于：所述小圆玻片以浓盐酸、洗洁精、浓硫酸依次浸泡处理24h，每次浸泡后用单蒸水冲洗；再用无水乙醇浸泡2h，三蒸水洗3遍后放温箱烘干；最后高压灭菌30min后干燥保存，在使用前将处理过的小圆玻片放入24孔板中，紫外灯灭菌30min。