[发明专利]重组融合蛋白质在快速诊断检测中的直接应用

权利要求书

1.一种直接应用重组融合蛋白质进行分析物快速检测的方法，其特征在于：

(1)构建融合蛋白质编码基因：将编码用于捕获和检测分析物的蛋白质编码序列、短小多肽标签和较大融合蛋白质DNA序列用重组DNA技术构建到一起，形成携带双重标签(短小多肽标签和较大融合蛋白质标签)的融合基因，克隆到表达载体。

(2)制备融合蛋白质：根据表达载体特点，诱导表达产生重组融合蛋白质。用针对短小多肽标签和较大融合蛋白质的亲和层析材料纯化重组融合蛋白质。

(3)制备检测信号试剂：用生物素标记融合蛋白质，用胶体金标记能够特异识别生物素的蛋白质，共同组成检测信号试剂；或者采用胶体金标记融合蛋白质，作为检测信号试剂。

(4)制备快速检测测试条：直接用未标记的融合蛋白质在反应平面介质上点印形成检测线；用能够与检测信号试剂特异结合的试剂在同一反应平面介质上点印形成质量控制线。根据检测信号试剂的不同，点印质控线的试剂可以是用生物素标记的常用蛋白质例如BSA，也可以是针对检测试剂的抗体。

(5)组装快速检测装置：将上述检测信号试剂、快速检测测试条、吸水纸、支持平板和塑料外壳等组装产生快速检测装置。

(6)检测：加入待测样本，根据检测线和质控线的反应，确定检测结果。

2.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于，其中所说的分析物是能够与所说的融合蛋白质特异结合的测试目的分子，主要包括但不限于人体及其他动物的抗体、抗体片段、其他蛋白质、肽、寡聚核苷酸适体、其他类型生物大分子及其复合物、以及亚细胞结构等。如果所说的分析物是抗体，则所说的融合蛋白质是能够与该抗体结合的抗原蛋白质或其片段(结构域)。

3.根据权利要求1和2所述的快速检测方法，其特征在于，其中所说的较大融合蛋白质是指任何与抗原基因融合并表达产生重组融合蛋白质后，能够提高原有抗原蛋白质水溶性、或提高抗原蛋白质表达量、或提高信号分子(生物素、胶体金、酶等等)标记效率的30个氨基酸残基以上的多肽序列。较大融合蛋白质包括但不限于任何来源的MBP和GST或其片段。一个重组融合蛋白质可以含有一个或若干个相同或不同的较大融合蛋白质。

4.根据权利要求1和2所述的快速检测方法，其特征在于，其中所说的短小多肽标签是指携带一定特异性结合功能的长度为4-30个氨基酸残基的多肽序列，包括但不限于His-tag、FLAG-tag、Strep-tag，等等。

5.根据权利要求1和2所述的快速检测方法，其特征在于，其中所说的融合蛋白质至少应用于所说的检测试剂或者在反应平面介质上点印形成检测线，或者同时应用于检测试剂和点印检测线。同时应用于检测试剂和点印检测线时，所用的融合蛋白质可以相同，也可以有所不同。

6.根据权利要求1和2所述的快速检测方法，其特征在于，其中所说的能够特异识别生物素的蛋白质包括任何能够特异性识别并结合生物素的任何来源的蛋白质，包括但不限于亲和素、链亲和素、中性亲和素、抗生物素抗体、这些蛋白质的突变体或修饰变异体以及其功能片段等。

7.据权利要求1和2所述的快速检测方法，其特征在于，其中所说的用于制备快速检测测试条的反应平面介质是能够固相结合蛋白质而形成检测线和质量控制线，并且允许液相样本扩散流动的薄层平面物质，包括但不限于硝酸纤维膜、尼龙膜、经过特殊处理的塑料表面或玻璃表面，等等。

8.权利要求1和2所述的快速检测方法，在临床检测诊断、流行病调查、生物标记鉴定分析、分子生物学和细胞生物学研究、蛋白质组学研究分析、新药靶位鉴定分析、临床药物动力学和药效学分析、畜牧兽医、农业病害诊断分析等领域的应用。

9.基于权利要求1和2所述直接应用重组融合蛋白质快速检测方法研制组装的快速检测装置及试剂，用于权利要求8所述的应用领域。其中所说的快速检测装置及试剂包括组装完整的快速检测装置及其组成部分，包括检测试剂、点印有检测线和质量控制线的快速检测测试条、吸水纸、塑料支持垫板、塑料外壳装置、用法说明等。等等。如果信号分子是酶，快速检测装置中还包括但不限于酶底物溶液和反应终止液。