[发明专利]一种高效酶诱导提取老鹳草中多酚类活性成分的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种酶诱导提高中草药中有效成分的含量、并对其进行负压空化辅助提取的方法，即获得富含没食子酸、柯里拉京、老鹳草素三种多酚类活性成分的老鹳草提取物的高效酶诱导辅助提取方法。

背景技术

老鹳草[Geranium]，为牻牛儿苗科老鹳草属多年生草本植物。又名老观草、鸭脚草等，是一种民间用药。老鹳草具有抗菌、抗病毒、抗氧化的功效，可用于治疗风湿痹痛、麻木拘挛、筋骨酸痛、泄泻痢疾(周海燕，1996；雷志勇等，2002)。根据国外相关报道，老鹳草提取物制剂还具有治疗肠炎，保护肝脏和抑制高血压的作用(Kinoshita et al，2007；Jae & Kye，2008)。

在老鹳草中，多酚类化合物是含量最高的组分，其中没食子酸、柯里拉京、老鹳草素有较好的药理作用，具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤、降血压、保肝等作用，对预防血栓也有一定功效(王晓丽等，2008；Shyr-Yi Lin et al，2008；K.Nagendra Prasad et al，2009；)。

传统的提取方法如煎煮法、浸渍法、渗漉法、回流提取及索式提取过程都是在完整植物细胞的情况下，通过浸润与渗透、使溶剂进入组织细胞、溶解细胞内物质并使其扩散至溶剂主体，这使溶剂提取细胞内生物活性成分成为可能。但由于细胞壁的屏障作用，决定了中药材有效成分的提取效率有一定限度(刘增琪等，2003；冯青然等，2003；贾立革等，2004)。所以传统提取方法存在提取温度过高，提取率低，有机溶剂污染环境等问题。

酶诱导是在提取的基础上，一方面利用酶(如半纤维素酶、纤维素酶、果胶酶等)将细胞壁的成分水解或降解，破坏细胞壁结构，使有效成分充分游离出来，溶解、混悬或胶溶于提取溶剂中，加速有效成分的释放，从而提高提取效率；另一方面利用酶(如β-葡萄糖苷酶等)将细胞内的苷类化合物水解成相应的苷元，从而提高细胞内目标物的含量。

所谓空化，一般是指液体内部局部压力降低时，液体内部或液固交界面上蒸汽或气体的空穴(空泡)的形成、发展和溃灭的过程。当溃灭发生在固体表面附近时，由于空泡瞬间(微秒级)溃灭产生极高的瞬时压强，极高压强的反复作用，从而破坏固体表面。因此，负压空化辅助提取技术是利用负压空化气泡产生强烈的空化效应和机械振动(李根生等，1997；高秋生，1999)，造成样品颗粒细胞壁快速破裂，加速了胞内物质向介质释放、扩散和溶解，从而促进提取。

现在有一些关于通过酶预处理来提取油类作物中油和蛋白质以及利用负压空化辅助提取技术提取植物材料中活性成分的报道，但将酶诱导技术和负压空化提取技术相结合提取老鹳草中的活性成分还未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以老鹳草为原料，高效地获得富含三种多酚类活性成分提取物的酶诱导辅助提取方法。在确定提取技术路线的基础上，对工艺进行优化，获得富含没食子酸、柯里拉京、老鹳草素三种多酚类活性成分的老鹳草提取物，从而提高老鹳草的资源利用度。

本发明的技术方案：将干燥的老鹳草与配制好的酶溶液混合，匀浆，将匀浆液转移入容器置于恒温摇床中进行振荡酶解，酶解过程之后将酶解液转移入提取容器中，进行负压空化辅助提取，将提取液进行减压抽滤后浓缩至干，即得到富含没食子酸、柯里拉京、老鹳草素三种活性成分的老鹳草提取物。具体方案如下：

(1)匀浆破碎酶解：以水为溶剂配制浓度为50～100U/mL的酶溶液，将酶溶液和干燥的老鹳草以溶液体积与原料质量比20～30mL/g混合，调节pH值至4.0～6.0，利用匀浆机匀浆1～2min。

(2)恒温酶解：将匀浆液转移入容器并置于恒温摇床中，在30～50℃下，酶解3～6h，转速100～120rpm。

(3)负压空化辅助提取：将酶解液转移入负压空化提取器中，提取1～3次，每次10～30min，将提取液减压抽滤后浓缩至干，即得到富含多酚类活性成分的老鹳草提取物。

本发明步骤(1)采用的匀浆粉碎技术与普通干燥粉碎技术相比，可将老鹳草在酶溶液中粉碎成细胞组织，并具有破坏细胞壁、使植物组织细胞与酶充分接触以及瞬时刺激诱发内源性酶活性的作用，从而提高目标成分的游离，增加目标成分的含量；而且匀浆粉碎时不产生粉尘，不污染环境。