[发明专利]一种标记活细胞内核酸的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种标记活细胞内核酸的试剂盒，其特征是，主要包括有：

(A)能够在活细胞内核酸合成的过程中插入核酸序列中的、带有1，3-二偶极基团或亲偶极基团的核苷类似物；

(B)含有与上述1，3-二偶极基团或亲偶极基团的对应的亲偶极基团或1，3-二偶极基团的生物分子探针；核苷类似物与生物分子探针通过所述1，3-二偶极基团能与对应的亲偶极基团进行“点击”反应。

2.根据权利要求1所述的标记活细胞内核酸的试剂盒，其特征是，所述1，3-二偶极基团为：氧化腈基、叠氮基、重氮甲基、硝酮基、或腈胺基；亲偶极基团为烯基、或炔基。

3.根据权利要求2所述的标记活细胞内核酸的试剂盒，其特征是，所述烯基为乙烯基、或丁烯基；所述炔基为乙炔基、丙炔基，或环状炔基。

4.根据权利要求3所述的标记活细胞内核酸的试剂盒，其特征是，所述核苷类似物为5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷、5-乙炔基尿嘧啶核苷、2’-脱氧-5-(1，7辛二炔)-尿嘧啶核苷、5-(1，7辛二炔)-尿嘧啶核苷、5-乙炔基-2’-脱氧胞嘧啶核苷、5-乙炔基胞嘧啶核苷、2’-脱氧-5-(1，7辛二炔)-胞嘧啶核苷、5-(1，7辛二炔)-胞嘧啶核苷、2’-脱氧-8-乙炔基-腺嘌呤核苷、8-乙炔基-腺嘌呤核苷、2’-脱氧-8-(1，7辛二炔)-腺嘌呤核苷、8-(1，7辛二炔)-腺嘌呤核苷、7-乙炔基-7-氮杂-2’脱氧-腺嘌呤核苷、7-乙炔基-7-氮杂-腺嘌呤核苷、7-乙炔基-7-氮杂-2’脱氧-腺嘌呤核苷、7-乙炔基-7-氮杂-腺嘌呤核苷、7-(1，7辛二炔)-7-氮杂-2’脱氧-腺嘌呤核苷、7-(1，7辛二炔)-7-氮杂-腺嘌呤核苷、2’-脱氧-8-乙炔基-鸟嘌呤核苷、8-乙炔基-鸟嘌呤核苷、2’-脱氧-8-(1，7辛二炔)-鸟嘌呤核苷、8-(1，7辛二炔)-鸟嘌呤核苷、7-乙炔基-7-氮杂-2’脱氧-鸟嘌呤核苷、7-乙炔基-7-氮杂-鸟嘌呤核苷、7-乙炔基-7-氮杂-2’脱氧-鸟嘌呤核苷、7-乙炔基-7-氮杂-鸟嘌呤核苷、7-(1，7辛二炔)-7-氮杂-2’脱氧-鸟嘌呤核苷、7-(1，7辛二炔)-7-氮杂-鸟嘌呤核苷、5-叠氮基-2’-脱氧尿嘧啶核苷、5-乙炔基尿嘧啶核苷、5-叠氮基-2’-脱氧胞嘧啶核苷、5-乙炔基胞嘧啶核苷、2’脱氧-8-叠氮基-腺嘌呤核苷、8-叠氮基-腺嘌呤核苷、2’脱氧-8-叠氮基-鸟嘌呤核苷、或8-叠氮基-鸟嘌呤核苷。

5.根据权利要求1所述的标记活细胞内核酸的试剂盒，其特征是，所述生物分子探针为生物荧光探针、免疫探针、生物素、抗原或半抗原、放射性探针分子、光感探针分子、或蛋白标签分子。

6.根据权利要求5所述的标记活细胞内核酸的试剂盒，其特征是，所述生物分子探针为激发波长300nm-1000nm的荧光探针。

7.根据权利要求6所述的标记活细胞内核酸的试剂盒，其特征是，所述生物分子探针为吲哚菁类、BODIPY类、Alexa Fluor类、FAM、FITC、或罗丹明生物荧光探针。

8.根据权利要求1所述的标记活细胞内核酸的试剂盒，其特征是，所述试剂盒还包括有催化剂、溶剂，所述催化剂为含亚铜离子化合物；所述溶剂为水、四氢呋喃、DMSO、乙腈、或四氢呋喃与水的混合物、或DMSO与水的混合物、或上述化合物的混合物。

9.根据权利要求8所述的标记活细胞内核酸的试剂盒，其特征是，含亚铜离子化合物为：硫酸铜和抗坏血酸、溴化亚铜、Cu(CH₃)4PF6、C54H45BrP5Cu、或Cu丝。

10.根据权利要求8或9所述的标记活细胞内核酸的试剂盒，其特征是，所述试剂盒还包括催化剂稳定剂，该催化剂稳定剂为TBTA，TCEP中的一种或多种。

11.一种标记活细胞内核酸的方法，其特征是，主要包括以下步骤：

(1)将1，3-二偶极基团或亲偶极基团的核苷类似物在核酸合成的过程中插入到核酸序列中，核酸被修饰；

(2)再加入含与上述1，3-二偶极基团或亲偶极基团的对应的亲偶极基团或1，3-二偶极基团的生物分子探针，含亚铜离子化合物的催化剂和溶剂，在常温下被修饰的核酸与生物分子探针进行“点击”反应，核酸被标记。