[发明专利]一对大白菜芜菁花叶病毒病EST-SSR标记及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一对EST-SSR标记，尤其是与大白菜芜菁花叶病毒(TuMV)抗病和感病基因紧密连锁的EST-SSR标记，属于生物技术领域。

背景技术

大白菜(Brassica rapa L.ssp.pekinensis)原产于我国，是我国乃至日本、朝鲜、韩国等国家的重要蔬菜。病毒病是我国大白菜的三大病害之一，平均每年造成5％的产量损失，有些年份减产10％以上，病害严重的地块几乎绝收。该病防治困难，目前，还没有可以普遍适用的抗病毒病药剂或其它行之有效的控制技术，培育抗病品种仍然是一条最有效且可持续的防治措施。但常规育种程序繁琐，在抗性选择时，表型观测困难，选育时间较长，另一方面抗性遗传易受环境条件的影响，选择准确度不高，难以适应生产的需要。采用分子标记辅助育种可大大加快育种进程。研究表明，我国大白菜病毒病主要是由三种病毒单独或复合浸染所致，即芜菁花叶病毒病(Turnip mosaic virus，简称TuMV)、黄瓜花叶病毒病(Cucumber mosaic virus，简称CMV)和烟草花叶病毒病(Tobacco mosaicvirus，简称TMV)。其中，TuMV是主要病原，占病毒分离物的71.9％。因此，筛选与大白菜TuMV抗性有关的分子标记对指导今后大白菜抗病毒病育种具有重要意义。

国内外许多学者报道过这方面的研究。如闫瑾琦(2000)采用RAPD方法找到2个与大白菜抗TuMV基因紧密连锁的标记，遗传距离分别为9.5cM和15.36cM。韩和平等(2004)筛选到2个与大白菜TuMV感病基因紧密连锁的AFLP分子标记，其遗传距离分别为7.5和8.4cM。张俊华等(2006)筛选出2个与大白菜TuMV-C3株系抗病基因紧密连锁的EST-PCR-RFLP分子标记BS300及BS160，遗传距离均为6.5cM。Gao等(2008)以甘蓝为材料，采用BSA法，筛选到两个与TuMV抗性基因连锁的RAPD分子标记，连锁距离分别为7.7c M和8.38cM，并将其转化为SCAR标记。但相对于实际应用，这些标记的连锁遗传距离还较远。一般情况下，5cM以下的分子标记才有应用价值。张晓伟等(2009)筛选到3个与大白菜TuMV抗性有关的QTLs连锁距离分别为2.9cM、2.4cM和0.5cM的AFLP标记，但均为显性标记，在后代选择中难以区分纯合体和杂合体。因此，筛选与大白菜TuMV抗性基因连锁距离在5cM以下且呈共显性的EST-SSR分子标记具有重要意义。

发明内容

为了克服现有分子标记在大白菜抗TuMV育种辅助选择应用中的不足，本发明提供一对连锁距离为3.8cM且呈共显性的EST-SSR分子标记，该对分子标记不仅能用于大白菜抗TuMV育种辅助选择，而且能在后代选择中区分纯合体和杂合体，从而有利于抗病材料的快速筛选和纯化。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一对大白菜芜菁花叶病毒病EST-SSR标记，其特征是，其为一对等位标记ATA157和ATA154，与大白菜TuMV抗性位点间的连锁距离为3.8cM，其中，标记ATA157的片段长度为157bp，具有序列表SEQ ID No.1中的序列；标记ATA154的片段长度为154bp，具有序列表SEQ ID No.2中的序列。

标记ATA157基因序列：

GCAAAACGGAGTACCCTAACGCCTTCATCAGGATCATCGGATTCGACAACAACCGTCAAGTCCAGTGCATCAGTTTCATCGCCTACAAGCCACCAAGCTTCACCGGTGCTTAATTCGCTTTCATATAATAATAATATCTTCTCATTTCATTTCCAAA(SEQ ID No.1)

标记ATA154基因序列：

TTGGAAATGAAATGAGAAGATATTATTATATGAAAGCGAATTAAGCACCGGTGAAGCTTGGTGGCTTGTAGGCGATGAAACTGATGCACTGGACTTGACGGTTGTTGTCGAATCCGATGATCCTGATGAAGGCGTTAGGGTACTCCGTTTTGCA(SEQ ID No.2)

本发明大白菜芜菁花叶病毒病EST-SSR标记的制备方法：

(1)采用改良CTAB法提取待测验单株的基因组DNA