[发明专利]融合蛋白MBP-NAP及其制备方法和应用

权利要求书

1.融合蛋白MBP-NAP，具有SEQ ID NO.1所示氨基酸序列。

2.权利要求1所述融合蛋白MBP-NAP的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)基因HP-napA的PCR扩增

根据H.pylori J99全基因组序列设计一对PCR引物，所述引物序列如下：

上游引物P1：5′-GGAGAATTCATGAAAACATTTGAAAT-3′

下游引物P2：5′-AAGTCGACTTAAGCTAAATGGGCTTCTAG-3′

以MEL-HP27基因组DNA为模板，扩增包含目的基因HP-napA的DNA片段，HP-napA基因长度为435bp；

(2)重组质粒pNEB-napA的构建

PCR产物、质粒pNEB193经EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切后，用Vitagene凝胶回收试剂盒分别回收双酶切片段，将两者的双酶切片段用T4DNA连接酶进行连接；用连接产物转化TB1感受态细胞，蓝白斑筛选，小量提质粒，EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切，特异PCR方法鉴定阳性克隆，得到含HP-napA的重组质粒pNEB-napA；

(3)重组质粒pMAL-c2X-napA的构建

重组质粒pNEB-napA、表达载体pMAL-c2X经EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切后，用Qiaquick凝胶回收试剂盒分别回收双酶切片段；然后将两片段以1∶6的摩尔比混合，用T4DNA连接酶进行连接；用连接产物转化TB1感受态细胞，得到E.coli TB1 pMAL-c2X-napA；

(4)制备融合蛋白MBP-NAP

大量诱导E.coli TB 1pMAL-c2X-napA，超声破碎，取上清液，硫酸铵沉淀法得粗提物，粗提物脱盐，收集组分真空泵冻干保存即得。

3.权利要求1所述融合蛋白MBP-NAP在增强Th1细胞免疫方面的应用。