[发明专利]调味品中大肠菌群的快速检测方法

权利要求书

1.一种调味品中大肠菌群的快速检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将样品利用无菌生理盐水稀释5～40倍，加入助滤剂，用真空过滤法滤过一级滤膜，取滤后液过二级滤膜，再利用20～50ml无菌生理盐水洗涤，菌体截留在二级滤膜上；

2)将菌体置入增菌增酶培养液中，对菌体进行修复、增菌增酶培养；

3)在培养后的菌体悬液中加入包含发光试剂底物、大肠菌群温和裂解液、发光增强剂的发光检测试剂进行发光值检测，根据发光值判断大肠菌群数量；

所述增菌增酶培养液包括以体积比100∶1混合的组分A、组分B，组分A为：每1000ml蒸馏水中含有胰蛋白胨0.5～2g，氯化钠2～5g，磷酸二氢钾6～8g，氢氧化钠1～2g，组分B为：每100mL蒸馏水中含有β-半乳糖苷酶诱导物0.05-0.2g，亚致死细菌快速修复物3-6g，细菌快速增长剂2-5g。

2.如权利要求1的调味品中大肠菌群的快速检测方法，其特征在于，步骤1)中，所述一级滤膜为30μm聚丙烯滤膜，所述二级滤膜为0.2-0.45μm混合醋酸纤维素滤膜。

3.如权利要求1的调味品中大肠菌群的快速检测方法，其特征在于，步骤2)中，大肠菌群的培养条件为：将分离的菌体悬浮于增菌增酶培养液中于39℃～42℃的恒温培养箱中培养6～7小时。

4.如权利要求1的调味品中大肠菌群的快速检测方法，其特征在于，组分A在121℃灭菌15分钟后再与组分B混合。

5.如权利要求1的调味品中大肠菌群的快速检测方法，其特征在于，步骤3)中的发光值检测为：将50μl～100μl的增菌增酶培养后的菌体悬液与50～100μl发光检测试剂反应10～50分钟，利用发光光度计于530nm～590nm处检测发光值，将检样发光值与阴性对照样发光值比对。

6.如权利要求1的调味品中大肠菌群的快速检测方法，其特征在于，所述β-半乳糖苷酶诱导物为乳糖、异丙基硫代半乳糖苷或者半乳糖中的任一种。

7.如权利要求1的调味品中大肠菌群的快速检测方法，其特征在于，所述亚致死细菌快速修复物为甘油、葡萄糖、丙酮酸钠、抗坏血酸、维生素E中的任一种或多种。

8.如权利要求1的调味品中大肠菌群的快速检测方法，其特征在于，所述细菌快速增长剂为三磷酸腺苷、肌酐，肌苷或者牛血清提取物中的任一种或多种。

9.如权利要求1的调味品中大肠菌群的快速检测方法，其特征在于，组分A中，每1000ml蒸馏水还包括自由基清除剂1g～3g、十二烷基磺酸钠0.03g～0.06g。

10.如权利要求9的调味品中大肠菌群的快速检测方法，其特征在于，所述自由基清除剂为活性炭、可溶性淀粉、半胱氨酸、二苯胺、巯基乙醇或α-生育酚中的任一种。

11.如权利要求1的调味品中大肠菌群的快速检测方法，其特征在于，所述大肠菌温和裂解液为细胞膜破坏试剂，所述细胞膜破坏剂为EDTA、Nisin、Tween-80、硫酸粘菌素B、曲拉通、CATB中的任一种。

12.如权利要求1的调味品中大肠菌群的快速检测方法，其特征在于，所述发光试剂底物为AMPGD、铕试剂、荧光素-β-半乳糖苷中的任一种。

13.如权利要求1的调味品中大肠菌群的快速检测方法，其特征在于，所述发光增强剂为季铵盐高聚物。

14.如权利要求1的调味品中大肠菌群的快速检测方法，其特征在于，所述助滤剂为吐温-60或吐温-80。