[发明专利]苹果MdMYB1基因中与着色相关的两处突变及其检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及苹果MdMYB1基因中的两处突变与苹果果实着色性状的关系及突变检测方法。

背景技术

苹果(Malus domestica Borkh.)是我国果树产业中重要的大宗水果，其着色问题是影响我国许多产区苹果质量的一个重要因素，培育着色好的品种是生产中急需的。通过研究利用苹果着色相关基因的序列变异，开发果实着色性状的分子标记，提早鉴定杂交后代植株果实着色性状，对杂交后代植株提早进行筛选，将有助于降低早期试验费用和工作量，以低成本尽快培育出着色好的苹果新品种，增强我国苹果的质量和市场竞争力。

苹果的着色与果皮中的花色苷有关，花色苷的合成涉及查尔酮合成酶(CHS)、类黄酮3-羟基化酶(F3H)、二氢黄酮醇还原酶(DFR)、UDP-葡萄糖类黄酮-3-0-葡萄糖转移酶(UFGT)等酶的基因。研究表明，花色苷的积累与这些基因、特别是UFGT基因的表达水平有关，这些基因的表达受到MYB家族转录因子的调控，MdMYB1基因是一个与果实着色有关的功能基因(Takos等，2006)。Takos等(2006)通过分析MdMYB1-1(GenBank登录号DQ886414)等基因序列，找到了一个与果实着色性状有关的碱基突变位点，开发出一个dCAPS标记。dCAPS标记是一种改进的CAPS标记(derived CAPS)，而CAPS标记是指切割扩增的多态性序列标记(Cleaved amplified polymorphic sequence)。Takos等(2006)开发的dCAPS标记虽然不能将澳洲青苹等品种与一些着色品种区分开，但可以区分其它一些着色与非着色品种，可以完全区分杂交亲本植株(粉红女士姊妹株、金帅)及其后代植株，在杂交后代植株的早期选择中利用价值高。该dCAPS标记的缺点是酶切后的片段长度仅有29bp的差异，利用普通的琼 脂糖电泳无法检测，需要用价格约为7000元/125g的昂贵NuSieve GTG琼脂糖进行电泳检测。本发明的目的是通过进一步分析MdMYB1基因序列，寻找其它与苹果果实着色性状相关的突变位点，开发可用普通琼脂糖电泳检测的分子标记(例如CAPS标记)用来鉴定苹果植株果实着色性状。

参考文献

[1]苑克俊，张毅，孙瑞红，张振成.苹果、葡萄花色苷生物合成研究进展.山东农业科学，1998，6：46-49.

[2]张学英，张上隆，骆军，叶正文，李世诚.果实花色素苷合成研究进展.果树学报，2004，21(5)：456-460.

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[4]Ban，Y.，Honda，C.，Hatsuyama，Y.，Igarashi，M.，Bessho，H.and  Moriguchi，T.Isolation and functional analysis of a MYB transcription factor gene that isa key regulator for the development of red coloration in apple skin.Plant CellPhysiology，2007，48(7)：958-970

发明内容

本发明找出苹果MdMYB1基因中两处突变与苹果果实着色性状相关，提供检测这些突变、进而鉴定苹果果实着色性状的分子标记方法和测序方法。

本发明解决问题所采用的技术方案是：根据苹果MdMYB1基因(GenBank登录号DQ886414)序列设计引物，利用设计的引物对8个不同苹果品种的基因组DNA进行PCR扩增，通过对这些苹果品种的PCR扩增产物测序与序列比对寻找突变，然后分析这些苹果品种的基因突变与果实着色性状的关系，找出与苹果果实着色性状相关的两处突变，开发用普通琼脂糖电泳检测突变的分子标记方法(例如CAPS标记方法)用来鉴定苹果果实着色性状，也可通过测序方法获得突变位点碱基信息鉴定苹果果实着色性状。