[发明专利]钝齿棒杆菌N-乙酰谷氨酸激酶突变提高精氨酸产量的方法

权利要求书

1.突变型N-乙酰谷氨酸激酶，将含有如序列表中的SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的N-乙酰谷氨酸激酶进行定点突变，其中野生型N-乙酰谷氨酸激酶第287位的甘氨酸被天冬氨酸所取代，使得精氨酸的反馈抑制作用被减弱或解除。

2.根据权利要求1中所述的突变型N-乙酰谷氨酸激酶，其特征是野生型N-乙酰谷氨酸激酶来自高产L-精氨酸菌株钝齿棒杆菌SYPA5-5。

3.根据权利要求1和2中所述N-乙酰谷氨酸激酶，包含一种在序列表中的SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的287位甘氨酸以外的一个或多个位置具有一个或几个氨基酸的缺失、取代、插入或添加的氨基酸序列。其特征是此蛋白受到精氨酸产物反馈抑制作用下调。

4.编码根据权利要求1-3中的任意一项N-乙酰谷氨酸激酶的DNA。序列表中的SEQ ID NO：2的核苷酸序列即为来自钝齿棒杆菌SYPA5-5的编码具有N-乙酰谷氨酸激酶活性的DNA序列，对其进行突变后，其特征是其编码的N-乙酰谷氨酸激酶对精氨酸敏感度降低。

5.根据权利要求1和4中的突变型N-乙酰谷氨酸激酶编码基因在大肠杆菌或钝齿棒杆菌中表达，其中包括生产精氨酸的生产用菌株及基因工程菌。其特征是突变型基因在大肠杆菌或钝齿棒杆菌中表达，不受到代谢产物精氨酸的反馈抑制。

6.根据权利要求1和5，构建重组质粒pJC1-tac-argB^SD，其特征是含有突变型抗反馈抑制的N-乙酰谷氨酸激酶基因argB^SD。

7.根据权利要求5和6，利用电转化法转化高产L-精氨酸钝齿棒杆菌SYPA5-5中，获得重组基因工程菌钝齿棒杆菌SYPA/pJC1-tac-argB^SD，其特征是基因工程菌中含有重组质粒pJC1-tac-argB^SD。

8.根据权利要求5或7，该重组钝齿棒杆菌用于精氨酸生产中，其特征是利用反馈抑制作用下调发酵钝齿棒杆菌产L-精氨酸产量得以提高。