[发明专利]一种检测克伦特罗的免疫试剂盒及其专用抗体

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测克伦特罗的免疫试剂盒及其专用抗体。

背景技术

克伦特罗(Clenbuterol，CLE)，俗称瘦肉精，是一种β兴奋剂。因其能改善脂肪型动物的肉与脂肪的比例，并能加速动物生长，而被广泛添加于动物饲料中，并且可以残留在动物体内。然而这种药物对人有严重的副作用。轻则导致心跳及心律不正常，重则可引发心脏病。目前，我国及许多国家已禁止其作为饲料添加剂使用。

在克伦特罗的检测方法方面，目前最为常用的方法包括高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱联用(GC-MS)、液相色谱-质谱联用(LC-MS)、酶联免疫吸附分析法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)等方法。HPLC法具有检测精确度高、假阳性率低的优点，主要缺点是仪器价格昂贵、操作比较繁琐，耗时长，检测费用昂贵；且前期样品的萃取条件的选择也对检测灵敏度和准确性有较大影响。GC-MS灵敏度很高，假阳性率低。该方法的主要缺点是样品需要衍生化这样复杂的前期处理。LC-MS的缺点与GC-MS一样，操作步骤繁琐，需要贵重仪器，所以一般用作对阳性结果的确认手段。酶联免疫吸附分析法是当前应用最广、发展最快的免疫酶技术之一，主要优点在于检测迅速，样品前处理简单，检测系统操作简单，成本低，同时便于进行大规模检测。化学发光免疫检测技术不同于酶联免疫吸附分析法，它是化学发光法和免疫分析法结合的产物，因此同时具有化学发光检测技术的高灵敏性和免疫分析技术的高特异性。化学发光免疫分析法的基本原理与ELISA相似，不同之处在于酶标记物的反应体系是化学发光反应。

目前，用于免疫检测的抗体都是单克隆抗体或多克隆抗体。单克隆抗体或多克隆抗体的制备必须通过细胞培养获得，整个生产过程复杂，消耗时间长，费用高，且不易进行操作。单链抗体是将抗体重链可变区和轻链可变区基因通过一个短肽链连接后融合表达出来的抗体片断，具有分子量小、特异性高、结合力强、易于利用基因工程技术操作等优点。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种单链抗体及其编码基因。

本发明所提供的单链抗体，由重链可变区、连接重链可变区和轻链可变区的短肽、轻链可变区依次连接组成，所述重链可变区的氨基酸序列如序列1自N末端起第15-132位氨基酸残基所示，所述轻链可变区的的氨基酸序列如序列1自N末端起第148-266位氨基酸残基所示。

上述单链抗体中，所述连接重链可变区和轻链可变区的短肽的氨基酸序列如序列1自N末端起第133-147位氨基酸残基所示。

所述编码基因为如下1)、2)、3)、4)或5)所示：

1)所述重链可变区的编码基因为自序列表中序列2的5′末端起第43-396位核苷酸所示的DNA分子；

2)所述轻链可变区的编码基因为自序列表中序列2的5′末端起第442-798位核苷酸所示的DNA分子；

3)所述连接重链可变区和轻链可变区的短肽的编码基因为自序列表中序列2的5′末端起第397-441位核苷酸所示的DNA分子；

4)序列表中序列2自5′末端起第43-798位核苷酸所示的DNA分子；

5)在严格条件下与1)、2)或3)或4)限定的DNA序列杂交且具有相同功能的DNA分子。

含有上述任一所述编码基因的重组载体、重组菌、转基因细胞系和表达盒也属于本发明的保护范围。

上述任一所述单链抗体在检测克伦特罗或沙丁胺醇中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明的另一个目的是提供一种检测克伦特罗或沙丁胺醇的免疫试剂盒。

本发明所提供的检测克伦特罗或沙丁胺醇的免疫试剂盒，为下述1)、2)、3)或4)中任一所述试剂盒：

1)试剂盒中包括克伦特罗半抗原与载体蛋白的偶联物、上述任一所述单链抗体和酶标记抗抗体；其中，所述偶联物作为包被原；

2)试剂盒中包括克伦特罗半抗原的酶标记物、上述任一所述单链抗体和抗抗体；其中，所述抗抗体作为包被原；

3)试剂盒中包括克伦特罗半抗原的酶标记物、上述任一所述单链抗体；其中，所述单链抗体作为包被原；

4)试剂盒中包括克伦特罗半抗原与载体蛋白的偶联物、上述任一所述单链抗体的酶标记物；其中，所述偶联物作为包被原。

上述任一所述免疫试剂盒中，所述试剂盒中包括克伦特罗标准品溶液、洗涤液和样品浓缩液；所述克伦特罗标准品为盐酸克伦特罗；

所述克伦特罗标准品溶液为如下各浓度的溶液：0ng/L、50ng/L、150ng/L、450ng/L、1350ng/L和4050ng/L；