[发明专利]一种莱克多巴胺抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种莱克多巴胺抗体及其应用。

背景技术

莱克多巴胺(Ractopamine，RCT)是一种苯乙醇胺类物质。用于畜牧渔业，它是一种“营养再分配剂”，属于β兴奋剂，莱克多巴胺做为“瘦肉精”的替代品效果好，经济回报高，使用普遍；用于医药，它是一种强心药，可用于治疗肥胖症和肌肉萎缩症。但人累计摄入剂量超过一定值，或食用莱克多巴胺高残留在内脏组织时，出现中毒反应，症状表现为骨骼肌收缩增加，破坏快缩肌纤维与慢缩肌纤维之间的融合，引发肌肉震颤，四肢和面部的肌肉尤为明显，其它中毒症状包括心动过速、心率失常、腹痛、肌肉疼痛、恶心和晕眩等，因此我国禁止使用，我国农业部第176号公告规定莱克多巴胺为禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物。因此，检测莱克多巴胺在动物性食品中的残留量是非常必要的。

现常用于莱克多巴胺残留检测的方法主要有微生物法、仪器分析法和酶联免疫吸附实验(ELISA)。微生物检测法虽然经济、操作简便，但在样本中有其他微生物抑制剂存在时，其灵敏度和特异性受到限制；高效液相色谱分析法、气谱、气质联机法等单纯的仪器分析方法，虽然灵敏度高，但样本前处理及测定操作烦琐，费用高，不适宜于大量样本筛查。ELISA是将抗体抗原反应的高度特异性、敏感性与酶的高度催化性有机地结合，在不同的载物上进行有毒物质残留分析的方法，具有操作简便快速、成本低、灵敏度较高、分析样本量大的优点。

目前，用于免疫检测的抗体都是单克隆抗体或多克隆抗体。单克隆抗体或多克隆抗体的制备必须通过细胞培养获得，整个生产过程复杂，消耗时间长，费用高，且不易进行操作。单链抗体是将抗体重链可变区和轻链可变区基因通过一个短肽链连接后融合表达出来的抗体片断，具有分子量小、特异性高、结合力强、易于利用基因工程技术操作等优点。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测莱克多巴胺的单链抗体及其编码基因。

本发明所提供的单链抗体，由重链可变区、连接重链可变区和轻链可变区的短肽、轻链可变区依次连接组成，所述重链可变区的氨基酸序列如序列1自N末端起第9-130位氨基酸残基所示，所述轻链可变区的的氨基酸序列如序列1自N末端起第146-250位氨基酸残基所示。

上述单链抗体中，所述连接重链可变区和轻链可变区的短肽的氨基酸序列如序列1自N末端起第131-145位氨基酸残基所示。

所述编码基因为如下1)、2)、3)、4)或5)所示：

1)所述重链可变区的编码基因为自序列表中序列2的5′末端起第25-390位核苷酸所示的DNA分子；

2)所述轻链可变区的编码基因为自序列表中序列2的5′末端起第436-750位核苷酸所示的DNA分子；

3)所述连接重链可变区和轻链可变区的短肽的编码基因为自序列表中序列2的5′末端起第391-435位核苷酸所示的DNA分子；

4)序列表中序列2的5′末端起第25-750位核苷酸所示的DNA分子；

5)在严格条件下与1)、2)或3)或4)限定的DNA序列杂交且具有相同功能的DNA分子。

含有上述任一所述编码基因的重组载体、重组菌、转基因细胞系和表达盒也属于本发明的保护范围。

上述任一所述单链抗体在检测莱克多巴胺中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明的另一个目的是提供一种检测莱克多巴胺的免疫试剂盒。

本发明所提供的检测莱克多巴胺的免疫试剂盒，为下述1)、2)、3)或4)中任一所述试剂盒：

1)试剂盒中包括莱克多巴胺半抗原与载体蛋白的偶联物、上述任一所述单链抗体和酶标记抗抗体；其中，所述偶联物作为包被原；

2)试剂盒中包括莱克多巴胺半抗原的酶标记物、上述任一所述单链抗体和抗抗体；其中，所述抗抗体作为包被原；

3)试剂盒中包括莱克多巴胺半抗原的酶标记物、上述任一所述单链抗体；其中，所述单链抗体作为包被原；

4)试剂盒中包括莱克多巴胺半抗原与载体蛋白的偶联物、上述任一所述单链抗体的酶标记物；其中，所述偶联物作为包被原。

上述任一所述免疫试剂盒中，所述试剂盒中包括莱克多巴胺标准品溶液、洗涤液和样品浓缩液；所述莱克多巴胺标准品为盐酸莱克多巴胺；

所述莱克多巴胺标准品溶液为如下各浓度的溶液：0μg/L、0.15μg/L、0.45μg/L、1.35μg/L、4.05μg/L和12.15μg/L；