[发明专利]一种莱克多巴胺抗体及其应用

权利要求书

1.一种单链抗体，由重链可变区、连接重链可变区和轻链可变区的短肽、轻链可变区依次连接组成，所述重链可变区的氨基酸序列如序列1自N末端起第9-130位氨基酸残基所示，所述轻链可变区的的氨基酸序列如序列1自N末端起第146-250位氨基酸残基所示。

2.根据权利要求1所述的单链抗体，其特征在于：所述连接重链可变区和轻链可变区的短肽的氨基酸序列如序列1自N末端起第131-145位氨基酸残基所示。

3.权利要求1或2所述单链抗体的编码基因。

4.根据权利要求3所述的编码基因，其特征在于：所述编码基因为如下1)、2)、3)、4)或5)所示：

1)所述重链可变区的编码基因为自序列表中序列2的5′末端起第25-390位核苷酸所示的DNA分子；

2)所述轻链可变区的编码基因为自序列表中序列2的5′末端起第436-750位核苷酸所示的DNA分子；

3)所述连接重链可变区和轻链可变区的短肽的编码基因为自序列表中序列2的5′末端起第391-435位核苷酸所示的DNA分子；

4)序列表中序列2的5′末端起第25-750位核苷酸所示的DNA分子；

5)在严格条件下与1)、2)或3)或4)限定的DNA序列杂交且具有相同功能的DNA分子。

5.含有权利要求3或4所述编码基因的重组载体、重组菌、转基因细胞系和表达盒。

6.权利要求1或2所述单链抗体在检测莱克多巴胺中的应用。

7.一种检测莱克多巴胺的免疫试剂盒，为下述1)、2)、3)或4)中任一所述试剂盒：

1)试剂盒中包括莱克多巴胺半抗原与载体蛋白的偶联物、权利要求1或2所述单链抗体和酶标记抗抗体；其中，所述偶联物作为包被原；

2)试剂盒中包括莱克多巴胺半抗原的酶标记物、权利要求1或2所述单链抗体和抗抗体；其中，所述抗抗体作为包被原；

3)试剂盒中包括莱克多巴胺半抗原的酶标记物、权利要求1或2所述单链抗体；其中，权利要求1或2所述单链抗体作为包被原；

4)试剂盒中包括莱克多巴胺半抗原与载体蛋白的偶联物、权利要求1或2所述单链抗体的酶标记物；其中，所述偶联物作为包被原。

8.根据权利要求7所述的免疫试剂盒，其特征在于：

所述试剂盒中包括莱克多巴胺标准品溶液、洗涤液和样品浓缩液；所述莱克多巴胺标准品为盐酸莱克多巴胺；

所述莱克多巴胺标准品溶液为如下各浓度的溶液：0μg/L、0.15μg/L、0.45μg/L、1.35μg/L、4.05μg/L和12.15μg/L；

每1升所述洗涤液是按照如下方法配制得到的：将10ml吐温20，5g叠氮化钠和990ml磷酸盐缓冲液混合，得到所述洗涤液；所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.005M-0.015M，具体为0.01M，pH值为7.2-7.6，具体为7.4；

所述样品浓缩液为浓度为0.03mol/L-0.05mol/L的磷酸盐缓冲液，具体为0.04mol/L的磷酸盐缓冲液；

所述莱克多巴胺半抗原与载体蛋白的偶联物是按照包括如下步骤的方法制备得到的：将每68mg莱克多巴胺半抗原加入到4ml戊二酸酐的吡啶溶液中，25℃搅拌22h，然后氮气吹干，得到的物质记作物质Ⅰ；

用8ml DMF与1，4-二噁烷的混合溶液溶解所述物质Ⅰ，再加入52.4μl正三丁胺，0℃搅拌10min，再加入28.8μL氯甲酸异丁酯，25℃搅拌1h，得到溶液Ⅰ；DMF与1，4-二噁烷的混合溶液为DMF与1，4-二噁烷按1∶1体积比混合得到的溶液；

将所述溶液Ⅰ逐滴加入10ml载体蛋白的溶液中，25℃摇床搅拌12h，得到所述莱克多巴胺半抗原与载体蛋白的偶联物；载体蛋白的溶液是按照如下方法配制的：用浓度为0.1mol/L、pH值为8.5的硼酸钠溶液将100mg载体蛋白溶解，并定容至10ml，得到所述载体蛋白的溶液；

所述莱克多巴胺半抗原为盐酸莱克多巴胺；所述载体蛋白为牛血清白蛋白、人血清白蛋白、鼠血清蛋白、甲状腺蛋白、兔血清白蛋白、血蓝蛋白或卵清白蛋白；

所述抗抗体为鼠抗HIS标签单克隆抗体。