[发明专利]抗生链霉菌发酵生产喷司他丁的发酵培养基以及发酵方法

说明书

技术领域

本发明属于工业微生物技术领域，特别涉及一种新的抗生链霉菌发酵生产喷司他丁的发酵培养基以及相应的发酵方法。

背景技术

1974年warner lambert公司的Woo等从Streptomyces antiboticus发酵液中发现一种腺苷脱氨酶抑制剂-喷司他丁。1992年喷司他丁被FDA批准用于干细胞白血病(hairy cell leukemia，HCL)的治疗。随着对其临床应用的增加，市场需求量加大。但目前对喷司他丁生产研究的报道很少，唯一报道的发酵工艺见于US3923785，在该专利中，以抗生链霉菌NRRL3238为生产菌种，主要报道了一种较简单的培养基和培养方式，其目的是为了从发酵液分离到喷司他丁，以进行结构鉴定和生物活性检测。由于该专利的培养工艺过于简单，产物的发酵单位较低，不适用于规模化喷司他丁的生产。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题就是针对现有的利用抗生链霉菌发酵生产喷司他丁发酵单位低的不足，提供一种新的抗生链霉菌发酵生产喷司他丁的发酵培养基以及相应的发酵方法，其可以大大提高喷司他丁的发酵单位，提高生产效率。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案之一是：一种用于抗生链霉菌(Streptomyces antibioticus)发酵生产喷司他丁的发酵培养基，包括碳源和氮源，其中按培养基的总重量计，所述的碳源的含量是0.5～14％，所述的氮源的含量是0.5～10％，所述的碳源选自葡萄糖、糊精和小麦淀粉中的一种或多种，所述的氮源选自细豆粕粉、大豆蛋白、黄豆饼粉、酵母浸粉和棉子饼粉中的一种或多种。

本发明的发酵培养基中，所述的碳源的含量为0.5～14％，较优的范围为1～6％。

本发明的发酵培养基中，所述的氮源选自细豆粕粉、大豆蛋白、黄豆饼粉、酵母浸粉和棉子饼粉中的一种或多种。更佳的是选自细豆粕粉、大豆蛋白、黄豆饼粉和棉子饼粉中的一种或多种和酵母浸粉的混合物。最佳的是细豆粕粉和酵母浸粉的混合物。所述的氮源的含量为0.5～10％，较优的范围为1～6％。

本发明的发酵培养基中，如常规的抗生链霉菌的发酵培养基一样，还含有矿物质。矿物质的含量较佳的是0.1％～1％。所述的矿物盐可以是常规的抗生链霉菌的发酵培养基中所使用的各种矿物盐，一般作为渗透压调节剂，较佳的是NaCl。

本发明的发酵培养基如常规的抗生链霉菌的发酵培养基一样，较佳的还可以进一步的含有痕量生长因子。

本发明的发酵培养基如常规的抗生链霉菌的发酵培养基一样，较佳的还可以含有消泡剂。

本发明的一较佳的实施例是，本发明的发酵培养基包含：

0.5～14％碳源，所述的碳源选自葡萄糖、糊精和小麦淀粉中的一种或多种；

0.5～10％细豆粕粉、大豆蛋白、黄豆饼粉和/或棉子饼粉；

0.1～1％酵母浸粉；和

0.1～1％矿物盐。

本发明的发酵培养基的pH值较佳的是pH5.0-8.0，更佳的是pH5.5-7.5。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案之二是：一种喷司他丁的发酵生产方法，包括步骤：

(a)将抗生链霉菌(Streptomyces antibioticus)的种子液接种于发酵培养基中进行液体发酵培养，所述的发酵培养基是权利要求1所述的发酵培养基；

(b)从发酵液中分离出喷司他丁。

在步骤(a)中，所述的抗生链霉菌的种子液是将抗生链霉菌是按常规的方法将抗生链霉菌在种子培养基中培养而得到的。所述的种子培养基可以是现有的抗生链霉菌的种子培养基，较佳的包括2％葡萄糖、2％黄豆饼粉0.5％NaCl、0.25％CaCO₃。种子培养的温度较佳的是25～30℃。

本发明中，所述的抗生链霉菌可以是现有的各种抗生链霉菌菌株，较佳的是抗生链霉菌NRRL3238。

在步骤(a)中，所述的发酵培养的温度是20～40℃，较优的为25～37℃；优选的pH5～8，较优的为pH5.5～7.5。

在步骤(b)中，从发酵液中分离出喷司他丁中的方法是常规的方法，一般是将发酵液离心取上清，经过疏水柱的洗脱，浓缩脱色然后结晶，从而得到喷司他丁。

本发明中，上述优选条件在符合本领域常识的基础上可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明除特别说明之外，所用的百分比都是重量百分比(wt)。

本发明所用的原料或试剂除特别说明之外，均市售可得。