[发明专利]胎儿常见染色体异常诊断试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于染色体异常诊断试剂盒技术领域，尤其是涉及一种胎儿常见染色体异常诊断试剂盒及其制备方法。

背景技术

染色体异常是人类常见的重大出生缺陷，多伴有多发畸形或严重的智力障碍。唐氏综合征，即21-三体综合征(Down’s syndrome，DS)是其中最多见的染色体病(发生率为1/800-1000活产或1/150妊娠)。唐氏综合征患者患者平均寿命只有16.2岁，临床表现以中到重度智能及体格发育障碍为主，50％有先天性心脏畸形，如房、室间隔缺损，动脉导管未闭、法洛四联症等；消化道畸形、脐疝、裂唇、裂腭及多指(趾)、并指(趾)等畸形亦较多见；该症患者白血病的发生率较正常儿高20倍左右，10％伴有癫痫且易早发Alzheimer′s病。目前无特效治疗方法，主要是加强护理，针对性地进行智力和劳动技能训练，使其能够自食其力地生活。因此应用产前筛查和诊断的方法以降低该类患儿的出生率是当前围产优生和产前诊断的重要任务。

目前常规产前筛查技术均采用静脉取血的采血方法。即采用真空采血管抽取病人静脉血5ml，离心得到血清后，采用冷链的方式(5℃)进行运送，在实验室进行甲胎蛋白和游离HCG的检测。检测技术平台一般为时间分辨免疫荧光技术和化学发光技术。

由于静脉取血的筛查方法具有筛查成本偏高，检测技术依赖性大、标本不便于远距离寄送等固有的局限性，目前我国的产前筛查覆盖率仍不足30％，尤其在我国中西部地区及偏远农村，受到当地经济条件及运输条件的限制，唐氏综合症筛查难以得到广泛的开展。并且由于血样无法转运，只能当地检测，造成我国目前产前筛查中心分布分散，设备重复，血样检测和质量控制及机构管理的成本很大。

发明目的

本发明的目的之一在于提供一种干血片法诊断孕期胎儿常见染色体异常诊断试剂盒，通过静脉取血或末梢血取血制成干血片，实现标本的简易远程寄送，再通过一系列复溶技术实现在现有技术平台上各筛查指标(甲胎蛋白、游离βHCG)的准确检测。本发明所述的技术的应用完全改变了现有取血技术存在的标本保存、运送需冷链管理、易碎、成本较高等的巨大缺陷，有利于大规模推广产前筛查的覆盖面和技术可及性，克服了现有技术存在的缺陷。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

胎儿常见染色体异常诊断试剂盒，其特征是：所述试剂盒包括：

全血干血片滤纸；

标准品血片及质控品血片；

复溶洗脱缓冲液；

血清学检测试剂。

优选的是：所述的血清学检测试剂为：

1)抗AFP-Eu示踪剂，该示踪剂为銪标记的AFP IgG；

2)抗freeβHCG-Sm示踪剂，该示踪剂为钐标记的freeβHCG IgG；

上述标记的IgG将通过抗原抗体反应与待测标本中的AFP与freeβHCG结合，并在标记有固相AFP/freeβHCG抗体表面形成免疫复合物，每个样本的Eu和Sm荧光强度分别与样品中的AFP和游离βHCG含量成正比例关系。

更优的是：所述的血清学检测试剂为抗AFP和hAFP/Free-β-HCG示踪剂及检测洗脱缓冲液。

更优的是：所述的复溶或者检测洗脱缓冲液为pH为7.2～7.6的0.01～0.03M的Na₂HPO4-KH₂PO4缓冲液体系。称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4，溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌(至少20分钟)，保存于室温或4℃环境。

更优的是：还包括增强液，所述的增强液含有TritonX-100，乙酸和螯合剂的复合溶液。

更优的是：增强液为β萘甲酰三氟丙酮1.995mg；三辛基氧化膦9.840mg，Triton X-100 0.5mL，邻苯二甲酸氢钾0.695g，冰醋酸2.95mL，溶于500mL水，调pH至3.2，4℃避光保存。

增强液将Eu和Sm从标记抗体分离至溶液中，从而与增强液中的成分生成高荧光强度螯合物，将提高待测物质的检出低限浓度。

本发明的目的之二在于提供一种干血片法诊断孕期胎儿常见染色体异常诊断试剂盒的制备方法，采用如下技术方案：

一种胎儿常见染色体异常诊断试剂盒的制备方法，包括：

标准品血片及质控品血片的制备；

打孔及洗脱；

血清学检测；

结果计算。