[发明专利]胎儿常见染色体异常诊断试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.胎儿常见染色体异常诊断试剂盒，其特征是：所述试剂盒包括：

全血干血片滤纸；

标准品血片及质控品血片；

复溶洗脱缓冲液；

血清学检测试剂。

2.如权利要求1所述的胎儿常见染色体异常诊断试剂盒，其特征是：所述的血清学检测试剂为：

1)抗AFP-Eu示踪剂，该示踪剂为銪标记的AFP IgG；

2)抗freeβHCG-Sm示踪剂，该示踪剂为钐标记的freeβHCG IgG；

上述标记的IgG将通过抗原抗体反应与待测标本中的AFP与freeβHCG结合，并在标记有固相AFP/freeβHCG抗体表面形成免疫复合物，每个样本的Eu和Sm荧光强度分别与样品中的AFP和游离βHCG含量成正比例关系。

3.如权利要求1所述的胎儿常见染色体异常诊断试剂盒，其特征是：所述的血清学检测试剂为抗AFP和hAFP/Free-β-HCG示踪剂及检测洗脱缓冲液。

4.如权利要求1～3任一项所述的胎儿常见染色体异常诊断试剂盒，其特征是：所述的复溶洗脱缓冲液为pH为7.2～7.6的0.01～0.03M的Na₂HPO4-KH₂PO4缓冲液体系。

5.如权利要求4所述的胎儿常见染色体异常诊断试剂盒，其特征是：还包括增强液，所述的增强液为含有TritonX-100，乙酸和螯合剂的复合溶液。

6.如权利要求5所述的胎儿常见染色体异常诊断试剂盒，其特征是：所述的增强液为β萘甲酰三氟丙酮1.995mg；三辛基氧化膦9.840mg，Triton X-1000.5mL，邻苯二甲酸氢钾0.695g，冰醋酸2.95mL，溶于500mL水，调pH至3.2，4℃避光保存。

7.一种胎儿常见染色体异常诊断试剂盒的制备方法，包括：

AFP或/和HCG标准品血片及质控品血片的制备；

打孔及洗脱；

血清学检测；

结果计算。

8.如权利要求7所述的胎儿常见染色体异常诊断试剂盒的制备方法，其特征为：所述的AFP或/和HCG标准品血片及质控品血片的制备包括

1)采集男性健康志愿者静脉血40～50ml，所述静脉血的血清AFP≤2ug/l；

2)4℃1000rpm/min离心15分钟，弃上清液，加入等量PBS溶液，充分混匀，重复离心洗涤步骤三次；

3)取制备完成的浓缩洗涤红细胞与试剂标准品溶液等量混合。检测混合液红细胞压积45％左右，将此混合液滴至滤纸片上，自然晾干，获得标准血片浓度分别为0，0.5，5，50，250，500U/ml；

4)将制备好的标准干血片4℃冰箱保存；

5)质控干血片的制备同标准血片，取浓缩洗涤红细胞与质控品等量混合制备而成。

9.如权利要求7所述的胎儿常见染色体异常诊断试剂盒的制备方法，其特征为：所述的打孔及洗脱包括用专用打孔钳在血片相同部位打下直径6mm标准品、质控品和样本血片放入相应的微孔中，加入100ul专用洗脱缓冲液，室温下慢速震荡1h洗脱。

10.如权利要求7所述的胎儿常见染色体异常诊断试剂盒的制备方法，其特征为：所述的血清学检测包括

1)Free βHCG的检测

1.1将抗Free βHCG示踪剂贮存液按比例稀释；

1.2在96微孔板中分别加入200ul示踪剂稀释液及25ul标准品或待测品；

1.325～30℃慢速震荡2.5小时；

1.4洗板4～6次；

1.5在多孔板中加入200ul增强液，慢速震荡5分钟；

1.6Wallac DELFIA系统根据标准品运行标准曲线，计算待测品浓度；

2)AFP的检测

2.1在96微孔板中分别加入200ul专用洗脱液及25ul标准品或待测品，慢速震荡1h；

2.2洗板2次；

2.3在微孔中加入200ul抗AFP示踪剂稀释液；

2.4室温下静置1h；

2.5洗板6次；

2.6在96孔板中加入200ul增强液，慢速震荡5分钟；

2.7Wallac DELFIA系统根据标准品运行标准曲线，计算待测品浓度。