[发明专利]一种黄菖蒲愈伤组织的培养方法

权利要求书

1.一种黄菖蒲愈伤组织的培养方法，其特征在于它包括如下步骤：

(1)当黄菖蒲种子胚芽上的愈伤组织直径超过0.5cm时，将其从种子胚芽上切除，接种到新鲜的固体继代培养基上，进行继代培养，此后每2周继代培养一次；

(2)取出一粒经步骤(1)继代培养的愈伤组织在无菌滤纸上用镊子夹成直径为0.1～0.2cm的小块，放入新鲜的培养液中，在25℃、90转/分钟条件下培养2周，形成愈伤组织悬浮液，将愈伤组织悬浮液按1∶30(v/v)接种到新鲜的培养液中进行继代培养，继代培养周期为2周；

(3)当需要使用愈伤组织进行快速繁殖或者转基因时，使用50目孔径的无菌尼龙膜过滤步骤(2)中的愈伤组织悬浮液，得到的大块愈伤组织转接到固体继代培养基上备用，过滤后剩余的愈伤组织悬浮液继续按照步骤(2)的方法培养；

步骤(1)和(3)中，所述的固体继代培养基组分如下：MS培养基，另加终浓度为30g/L的蔗糖，500mg/L的水解酪蛋白，2mg/L 2，4-二氯苯氧基乙酸，3g/L琼脂糖；

步骤(2)中，所述的培养液组分如下：MS培养基，另加终浓度为30g/L的蔗糖、500mg/L的水解酪蛋白、2mg/L 2，4-二氯苯氧基乙酸。

2.根据权利要求1所述的黄菖蒲愈伤组织的培养方法，其特征在于黄菖蒲种子胚芽上的愈伤组织按如下方法诱导：将灭过菌的黄菖蒲种子接种到固体继代培养基上，置于25℃、黑暗条件下培养2周，诱导出愈伤组织；所述的固体继代培养基组分如下：MS培养基，另加终浓度为30g/L的蔗糖，500mg/L的水解酪蛋白，2mg/L 2，4-二氯苯氧基乙酸，3g/L琼脂糖。

3.根据权利要求2所述的黄菖蒲愈伤组织的培养方法，其特征在于黄菖蒲种子按如下方法灭菌：

(a)采集黄菖蒲种子，手工去除外壳；

(b)将步骤(a)处理后的种子置于自来水下冲洗干净；

(c)将步骤(b)处理后的种子泡在浓度为0.01％(v/v)的Tween 80水溶液中，搅拌24～48小时；

(d)用蒸馏水冲洗步骤(c)处理后的种子，直到水澄清为止；

(e)将步骤(d)处理后的种子放到75％(v/v)的酒精中，搅拌90～120秒；

(f)将酒精倾倒出去，加入灭菌的蒸馏水，冲洗3～4次；

(g)将步骤(f)处理后的上述种子放入30％(v/v)的次氯酸钠溶液中，搅拌30～60分钟；

(h)将次氯酸钠溶液倾倒出去，用灭菌的蒸馏水冲洗种子6～8次。