[发明专利]适于PCR反应的快速提取食用菌基因组DNA的方法无效
| 申请号： | 201010162845.2 | 申请日： | 2010-04-28 |
| 公开（公告）号： | CN101831422A | 公开（公告）日： | 2010-09-15 |
| 发明（设计）人： | 许峰;刘宇;王守现;赵爽;耿小丽;孟莉莉;王兰青;魏民 | 申请（专利权）人： | 北京市农林科学院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京瑞盟知识产权代理有限公司 11300 | 代理人： | 王明书 |
| 地址： | 100097 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 适于 pcr 反应 快速 提取 食用菌 基因组 dna 方法 | ||
1.一种适于PCR反应的快速提取食用菌基因组DNA的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)取材：取菌丝体或子实体于离心管中；
(2)加入少量石英砂或玻璃珠后，用研磨杵对菌丝体或子实体进行研磨至糊状；
(3)加入抽提缓冲液，涡旋振荡1-3min；
(4)水浴10-15min；
(5)加入乙酸铵溶液，冰中放置8-10min；
(6)离心：10,000-13,000r/min离心10-15min；
(7)取上层水相至另一离心管中，加入冰预冷的异丙醇或无水乙醇，颠倒混匀，-20℃-4℃放置沉淀15-30min；
(8)离心：10,000-13,000r/min离心10-13min；
(9)弃上清，用70％乙醇洗涤沉淀，风干；
(10)加入ddH2O和RNaseA溶液中，完全溶解沉淀，-20℃保存。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：第(1)步取材，菌丝体取气生菌丝；子实体取菌盖部位，将取好的材料置于1.5mL离心管中。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：第(3)步中，加入0.5mL的抽提缓冲液，所述抽提缓冲液为200mmol/L Tris-HCl，250mmol/L NaCl，25mmol/L EDTA和2％SDS的混和液，涡旋振荡2min。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述Tris-HCl的pH值为8.5。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：第(4)步中，水浴温度为65℃。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：第(5)步中，水浴后立即加入浓度为10mol/L的乙酸铵溶液200μL。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：第(7)步中，加入异丙醇或无水乙醇的体积为上层水相体积的0.5-0.6倍，温度为0-4℃。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：第(7)步中，放置沉淀的温度为0℃以下。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：第(9)步中，用70％乙醇洗涤沉淀两次。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述食用菌为黑平王、美味牛肝菌、香菇、金针菇、血红铆钉菇、紫花脸香蘑。
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