[发明专利]一种甲型肝炎灭活疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种制备甲型肝炎灭活疫苗的方法，包括如下步骤：

步骤1：将保藏编号为CCTCC No.V92004的甲型肝炎病毒毒种L-A-1减 毒株接种于人胚肺二倍体细胞2BS株，培养至病毒增殖高峰期，用胰酶常规 消化细胞；

步骤2：离心取沉淀加入细胞裂解液在2-8℃作用16-24h，所述细胞裂 解液为含质量百分比2-5％乙二胺四乙酸二钠的0.2-0.5％去氧胆酸钠溶液；

步骤3：加入聚乙二醇使其充分作用，离心取沉淀用PBS缓冲液悬浮， 加入氯仿抽提，制备粗制甲肝病毒液；

步骤4：步骤3制备的粗制甲肝病毒液经凝胶层析纯化后，经0.2μm滤 膜除菌，灭活；

步骤5：将步骤4制备的甲肝病毒液经超滤膜超滤，经氢氧化铝佐剂吸 附，制成甲型肝炎灭活疫苗。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1所述培养为利用多 层细胞工厂或3L转瓶进行培养。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3所述聚乙二醇分子 量为6000，终浓度为体积百分比8％～10％。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3所述PBS缓冲液 为pH 5.5～7.5的0.01-0.02mol/L的PBS缓冲液。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4所述灭活为终浓度 为200-250μg/ml的甲醛溶液灭活12-14天。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤5所述超滤膜的截留 分子量为50-100KD。

7.根据权利要求1-6任一项所述方法制备的甲型肝炎灭活疫苗。

8.根据权利要求7所述的甲型肝炎灭活疫苗，其特征在于，所述疫苗灭 活甲肝病毒浓度为640～1280EU/ml。