[发明专利]一种采用霉菌固态发酵生产凝乳酶的方法

权利要求书

1.一种采用霉菌固态发酵生产凝乳酶的方法，所用霉菌筛选自江米酒酒醪，其特征在于制备步骤包括：

1)将浓度为1.0×10⁶CUF/mL的霉菌孢子悬液，以10％(v/v)接种量接种于固态发酵培养基中，30℃培养96h；

2)向上述培养物中加入2-4倍体积、浓度为0.3mol/L的NaCl溶液，在40℃温度下提取3次，每次抽提时间为20min，制得凝乳酶粗液；

3)采用中空纤维超滤浓缩工艺，将凝乳酶粗液浓缩10-12倍，得到凝乳酶浓缩液；

4)向凝乳酶浓缩液中加入保护剂及载体后进行喷雾干燥，即可制得该凝乳酶制剂。

2.根据权利要求1所述采用霉菌固态发酵生产凝乳酶的方法，其特征在于：所述霉菌孢子菌悬液的制备方法是，将霉菌在土豆培养基(PDA)上培养2-3天后，以含有0.01％(m/v)吐温80的无菌水洗涤收集孢子悬液，洗涤3～5次收集孢子，以血球计数板计算孢子数量。

3.根据权利要求1所述采用霉菌固态发酵生产凝乳酶的方法，其特征在于：所述固态发酵培养基成分为：糯米∶麸皮为1∶1(m∶m)、液固比为0.9∶1(v∶m)、葡萄糖2.8％(m/v)、Na₂SO₄ 0.031％(m/v)、吐温80 0.34％(m/v)、CaSO₄ 0.04％(m/v)、K₂SO₄ 0.04％(m/v)。

4.根据权利要求1所述采用霉菌固态发酵生产凝乳酶的方法，其特征在于：所述中空纤维超滤膜浓缩工艺中，中空纤维孔径分别为60kDa及6kDa。

5.根据权利要求1所述采用霉菌固态发酵生产凝乳酶的方法，其特征在于：所述保护剂为2％-3％(m/v)甘油和4％-5％(m/v)海藻糖，载体为脱脂奶粉，添加后使酶液中固形物含量达到25-30％。

6.根据权利要求1所述采用霉菌固态发酵生产凝乳酶的方法，其特征在于：所述喷雾干燥的工艺参数为：进口温度70-75℃，出口温度130-140℃。