[发明专利]一种化合物及其应用于单胺氧化酶活性的荧光检测方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种新化合物，所述的化合物可以作为荧光探针，应 用于单胺氧化酶活性的荧光检测方法中。

(二)背景技术

单胺氧化酶是一类线粒体膜结合酶，它在大脑和周围神经组织中 催化生物体内的胺类化合物，氧化脱氨生成相应的醛。研究表明单胺 氧化酶在代谢多巴胺的过程中，伴随产生自由基和过氧化氢等内源性 物质，其表达量的异常与帕金森病和抑郁症有着极其密切的关系。此 外测定分析患者血液中单胺氧化酶活性，对于急、慢性肝炎，肝硬化 早期诊断具有重要价值。因此寻找高灵敏度的单胺氧化酶的检测方法 具有较大的科研和临床应用价值。然而目前临床诊断中所用的荧光试 剂采取非直接法检测单胺氧化酶的活性，准确性不高。

目前有多种方法检测单胺氧化酶的活性：紫外法，分光光度法， 放射性法以及荧光法等。前两种方法的灵敏度不高，而放射性法虽具 有较高的灵敏度，但是它需要放射性标记的化合物，操作上有一定的 危险性。

因此，设计出一种更为快速、灵敏、有效的单胺氧化酶的检测方 法是相当必要和迫切的，而荧光探针作为一种非放射性的标记技术， 因其具有较好的安全性和较高的灵敏度而被广泛应用于细胞内、外酶 蛋白活性的检测。目前虽然有一些通过荧光探针检测和分析单胺氧化 酶的方法，但其制备都较为复杂，缺少一种简单、有效的荧光探针检 测方法。

(三)发明内容

本发明的目的是提供一种单胺氧化酶活性的荧光检测方法，方法 所用到的荧光探针是一种新化合物，其制备方法简单，性质稳定，检 测的精确度、准确度高，检测速度快。

本发明采用的技术方案如下：

一种如式(I)所示的化合物：

式(I)中，R₂为如式(II)～式(VI)所示的荧光基团之一：

式(I)中，R₁为C1～C10的烷基、C2～C10的烯基、C3～C10 的炔基、苯基、苄基或含有下列一个或两个以上取代基的苯基或萘基， 所述的取代基为C1～C5的烷基、卤素、羧基、硝基、叠氮基、C2～C5 的酯基或C2～C5的烯基；式(IV)或式(VI)中，R₃、R₄或R₅各 自独立为H、C1～C6的烷基、卤素、羧基、硝基、叠氮基、C2～C5 的酯基或C2～C5的烯基。

所述的R₁优选为CH₃、C₂H₅、C₃H₅、C₃H₃或苄基。

所述的R₂优选如式(II)所示的荧光基团。

本发明还提供所述的如式(I)所示的化合物的制备方法，所述 的方法包括以下步骤：(a)如式C所示的4-卤代吡啶和卤代烃R₁X 反应，得到式A所示的1-取代-4-卤代吡啶盐，所述X为F、Cl、Br 或I，Y为Cl、Br或I；(b)有机溶剂中，步骤(a)得到的式A所 示的1-取代-4-卤代吡啶盐与荧光化合物H-R₂在碱性物质的作用下， 反应得到式B所示的吡啶类化合物，所述的碱性物质为无机碱性物 质或有机碱性物质；(c)步骤(b)得到的式B所示的吡啶类化合物与 硼氢化钠进行还原反应得到式(I)所示的化合物；

R₂为如式(II)～式(VI)所示的荧光基团之一：

R₁为C1～C10的烷基、C2～C10的烯基、C3～C10的炔基、苯基、 苄基或含有下列一个或两个以上取代基的芳香基，所述的取代基为 C1～C5的烷基、卤素、羧基、硝基、叠氮基、C2～C5的酯基、C2～C5 的烯基；式(IV)或式(VI)中，R₃、R₄或R₅各自独立为H、C1～ C6的烷基、卤素、羧基、硝基、叠氮基、C2～C5的酯基或C2～C5的 烯基。