[发明专利]一种体外肝癌肝侵袭转移实验模型及其构建方法

权利要求书

1.一种体外肝癌肝侵袭转移实验模型，其特征在于，由高转移人肝癌细胞MHCC97H和裸鼠肝组织块经三维旋转混合培养得到。

2.权利要求1所述体外肝癌肝侵袭转移实验模型的构建方法，其特征在于，具体步骤为：

第一步：将DMEM/F12培养液、胎牛血清和青链霉素溶液以体积比为100∶10∶1的比例混合得到混合培养液；

第二步：将1×10⁷高转移人肝癌细胞MHCC97H混悬在10ml第一步获得的混合培养液中，随后置入10ml的RWV生物反应器中，接着置入混合培养液预平衡的裸鼠肝组织块，先静止10min再以速度7rpm/min～8rpm/min旋转培养10～15min，重复三次，然后静止30分钟，后以速度7rpm/min～8rpm/min旋转培养过夜，次日根据细胞团块的大小调节旋转培养速度，以悬浮在一个水平位置且不触及RWV反应器壁为宜，每36小时更换一次培养液，培养第7天后，旋转培养速度达到18rpm/min，每24小时更换一次培养液，到第15天，三维旋转混合培养结束。

3.如权利要求2所述的体外肝癌肝侵袭转移实验模型的构建方法，其特征在于，所述的青链霉素溶液是将青霉素和链霉素溶于0.85g/100ml氯化钠溶液中得到，所述的青霉素的浓度是10000单位/ml，所述的链霉素的浓度是10000单位/ml。

4.如权利要求2所述的体外肝癌肝侵袭转移实验模型的构建方法，其特征在于，所述裸鼠肝组织块的长、宽和高分别为2～3mm、2～3mm和2～3mm。

5.如权利要求2所述的体外肝癌肝侵袭转移实验模型的构建方法，其特征在于，所述的混合培养液预平衡的裸鼠肝组织块由以下方法得到：采用颈椎脱臼方法处死裸鼠后，手术获取裸鼠肝脏，用生理盐水冲洗直至无血液，将裸鼠肝脏组织切割为所需尺寸大小，浸泡在第一步获得混合培养液中进行预平衡。