[发明专利]基于生物条码的核酸纳米金生物传感器

权利要求书

1.一种基于生物条码的核酸纳米金生物传感器，其特征在于，其包括：

用于富集、转换并放大靶核酸信号的核酸放大装置；

用于测定靶核酸浓度的核酸检测装置；以及

液体试剂；

所述核酸放大装置包括：

微孔板，其上固定有第一寡核苷酸探针；以及

纳米金颗粒，其上偶联有第二寡核苷酸探针和条码寡核苷酸；

其中，所述第一寡核苷酸探针与第二寡核苷酸探针分别与靶核酸的两端序列互补，以致通过第一寡核苷酸探针-靶核酸-第二寡核苷酸探针的核酸夹心方式将纳米金颗粒固定在所述微孔板上，再通过洗涤去除未与微孔板结合的纳米金颗粒，用二硫苏糖醇释放出偶联在纳米金颗粒上的条码寡核苷酸；

所述核酸检测装置包括从左到右依次固定于胶板上的样品垫、玻璃纤维、硝酸纤维素膜和吸水纸；

所述玻璃纤维上涂有纳米金标记第三寡核苷酸探针，该第三寡核苷酸探针是由巯基修饰并与胶体金偶联形成的，该第三寡核苷酸探针包含与条码寡核苷酸一端互补的核苷酸序列；

所述硝酸纤维素膜上固定有两种寡核苷酸探针，为第四寡核苷酸探针和第五寡核苷酸探针，这些寡核苷酸探针是用生物素标记并与链霉亲和素偶联形成的；其中，固定于靠近吸水纸一端的第四寡核苷酸探针形成质控线，第四寡核苷酸探针与第三寡核苷酸探针互补；固定于靠近玻璃纤维一端的寡核苷酸探针第五寡核苷酸探针形成检测线，该第五寡核苷酸探针与条码寡核苷酸的另一端互补；

所述液体试剂包括：

用于裂解样品释放核酸的裂解缓冲液，其成分为：100mM Tris-HCl，pH 7.5、500mM LiCl、10mM EDTA、1％[w/v]十二烷基硫酸锂、5mM二硫苏糖醇、10U RNase抑制剂；

用于洗去微孔中未结合纳米金的洗涤液，其成分为：0.15M NaCl、0.01M磷酸缓冲液、0.1％SDS，pH 7.4；以及

用于释放结合在纳米金上条码核酸的转换液，包括：0.1M DTT、0.15MNaCl、0.01M磷酸缓冲液、0.1％SDS，pH 7.4。

2.根据权利要求1所述的核酸纳米金生物传感器，其特征在于：在所述核酸放大装置中，所述微孔板体积为100-1000mm³，板底包被第一寡核苷酸探针。

3.根据权利要求1所述的核酸纳米金生物传感器，其特征在于：在所述核酸放大装置中，所述寡核苷酸标记的纳米金颗粒的粒径在20-200nm之间。

4.根据权利要求1所述的核酸纳米金生物传感器，其特征在于：在所述核酸放大装置中，所述与靶核酸一端互补的第一寡核苷酸探针的长度为15-30nt，与靶核酸另一端互补的条码寡核苷酸的长度为20-40nt，两种核酸均在一端进行-SH修饰，第一寡核苷酸探针与条码寡核苷酸的浓度比例从1∶50到1∶200。

5.根据权利要求1所述的检测条码寡核苷酸的核酸纳米金生物传感器，其特征在于：在所述核酸检测装置中，所述质控线与检测线相距3-10mm。

6.根据权利要求1所述的检测条码寡核苷酸的核酸纳米金生物传感器，其特征在于：在所述核酸检测装置中，所述固定于胶板上的样品垫、玻璃纤维、硝酸纤维素膜和吸水纸的相邻部分彼此重叠1-5mm。

7.根据权利要求1所述的检测条码寡核苷酸的核酸纳米金生物传感器，其特征在于：在所述核酸检测装置中，所述胶体金的粒径为8-100nm。