[发明专利]Canine-SLAM/Vero细胞系及构建方法无效
| 申请号： | 201010155790.2 | 申请日： | 2010-04-21 |
| 公开（公告）号： | CN101851607A | 公开（公告）日： | 2010-10-06 |
| 发明（设计）人： | 高玉伟;刘玉秀;夏咸柱;杨松涛;黄耕;王承宇;侯小强;王铁成;冯娜 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/45;C12N15/63;C12R1/91 |
| 代理公司： | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 22100 | 代理人： | 陈宏伟 |
| 地址： | 130062 *** | 国省代码： | 吉林;22 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | canine slam vero 细胞系 构建 方法 | ||
1.一种Canine-SLAM/Vero细胞系，其特征在于：Vero细胞中转染含犬SLAM的真核表达载体，细胞表面稳定表达有犬瘟热病毒受体SLAM。
2.权利要求1所述细胞系的构建方法，技术解决方案如下：采集犬瘟热阳性犬抗凝血，应用犬淋巴细胞分离液分离外周血淋巴细胞，提取总RNA，通过PCR方法获得犬SLAM基因；构建pCAGGS-Neo/SLAM质粒；将构建的pCAGGS-Neo/SLAM表达盒转染到Vero细胞中，采用G418筛选稳定表达SLAM的细胞系；利用间接免疫荧光法鉴定和检测SLAM在细胞膜表面的表达情况，得到细胞系。
3.权利要求2所述细胞系的构建方法，包括以下步骤：
1)犬外周血淋巴细胞的分离
无菌颈静脉采集犬瘟热阳性犬抗凝血，应用犬淋巴细胞分离液分离外周血淋巴细胞；
2)犬SLAM基因cDNA编码的RT-PCR扩增
提取犬外周血淋巴细胞的总mRNA，应用Random Primer(6mer)pd(N)6、Oligo d(T)15反转录引物合成cDNA后，用引物对SLAM-F/SLAM-R扩增犬SLAM基因；
上游引物SLAM-F：5’-GCCTCGAGACAGGTGAGAGCTTGATGAAT-3’(Xho I)
下游引物SLAM-R：5’-GCAGATCTCAGCTCTCTGGGAACGTCAC-3’(Bgl II)；
3)重组表达载体pCAGGS-Neo/SLAM的构建和在Vero细胞上的表达；
4)Canine-SLAM/Vero细胞阳性克隆的筛选和培养
在脂质体介导pCAGGS-Neo/SLAM转染Vero细胞后，用含800μg/mL G418的2％DMEM培养液进行筛选，按常规在细胞长满时消化、传代，连续培养6周后，间接免疫荧光检测SLAM的表达情况，将得到细胞系。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所，未经中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201010155790.2/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
