[发明专利]鉴别内源性和外源性禽白血病病毒的三重PCR试剂盒无效
| 申请号： | 201010153921.3 | 申请日： | 2010-04-22 |
| 公开（公告）号： | CN101824489A | 公开（公告）日： | 2010-09-08 |
| 发明（设计）人： | 韩凌霞;司昌德;周刚 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司 11139 | 代理人： | 孙皓晨;余光军 |
| 地址： | 150001 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鉴别 内源 外源性禽 白血病病毒 三重 pcr 试剂盒 | ||
1.一种能同时鉴别内源性和外源性禽白血病病毒的三重PCR试剂 盒，包括：DNA聚合酶，dNTP，引物，PCR缓冲液，双蒸水；其特征在于： 所述的引物由3对引物组成，其中，第1对引物的序列为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，第2对引物的序列为SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示，第3 对引物的序列为SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示。
2.按照权利要求1所述的三重PCR试剂盒，其特征在于：还包括有 阳性对照质粒1、阳性对照质粒2、阳性对照质粒3和1个阴性对照；其 中，所述的阳性对照质粒1的制备方法包括：(1)以禽白血病病毒RAV-1 株的cDNA为模板，以SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2为引物进行PCR扩 增，得到793bp的扩增产物，将扩增产物回收并纯化后克隆至pMD18-T 载体，即得；
所述的阳性对照质粒2的制备方法包括：以禽白血病病毒RAV-1株 的cDNA为模板，以SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4为引物进行PCR扩增， 得到387bp的扩增产物，将扩增产物回收并纯化后克隆至pMD18-T载体， 得到阳性对照质粒2；
所述的阳性对照质粒3的制备方法包括：以感染内源性ALV的鸡胚 基因组DNA为模板，以SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6为引物进行PCR扩 增，得到234bp的扩增产物，将扩增产物回收并纯化后克隆至pMD18-T 载体，得到阳性对照质粒3。
3.按照权利要求1所述的三重PCR试剂盒，其特征在于：还包括空 白对照，所述的空白对照是蒸馏水。
4.按照权利要求1所述的三重PCR试剂盒，其特征在于：所述的 DNA聚合酶为rTaq DNA聚合酶。
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