[发明专利]人类免疫缺陷病毒抗体时间分辨免疫荧光分析法及试剂盒

说明书

技术领域：

本发明涉及人类免疫缺陷病毒抗体时间分辨免疫荧光分析法及试剂盒，特别是人类免疫缺陷病毒HIV(1+2型)抗体检测试剂盒。

背景技术：

艾滋病(AIDS)是Acquired Immune Deficiency Syndrome的简称，即“后天(获得性)免疫缺乏症候群”。艾滋病是由艾滋病毒所引起的，艾滋病毒又称为人类免疫缺乏病毒(Human Immunodeficiency Virus)，简称HIV。自1981年首先在美国被发现至今近20年的时间内，已经在全世界发生了非常广泛的流行，造成十分严重的危害。据《中国艾滋病防治联合评估报告(2007年)》统计，截至2007年10月底，全国累计报告艾滋病病毒感染者和艾滋病病人223501例，其中艾滋病病人62838例，死亡报告22205例。

根据联合国艾滋病规划署(UNAIDS)与世界卫生组织(WHO)共同发布的2007年艾滋病疫情更新报告(2007AIDS Epidemic Update)，2007年全球HIV携带者约3320万人，250万例为新发HIV感染，210万人死于艾滋病。AIDS仍是目前人类死亡的重要原因。同时女性感染的人数也急剧增加，这也意味着通过母婴传播，越来越多的婴儿感染HIV。HIV是绝对依赖病源学诊断的传染病，HIV检测是HIV防治工作的一个重要的组成部分；由于HIV有较长的潜伏期，只有通过病原学检测才能发现HIV，并有效地控制HIV通过血液、性接触和母婴途径传播。

人类免疫缺陷病毒(HIV)自从1981年被发现以来，科学家们已进行了大量研究，建立了各种检测方法。抗HIV试剂自问世以来，已逐步完善并被普遍用于血源筛查和临床诊断。当前市场上主要的HIV抗体诊断试剂为第三代试剂，在灵敏度和特异性方面均比前代试剂有很大提高。

发明内容：

本发明的目的是提供一种用于人类免疫缺陷病毒HIV(1+2型)抗体检测的时间分辨免疫荧光分析法及试剂盒，主要解决现有技术存在的灵敏度低、稳定性差、操作烦琐及污染环境等技术问题。本发明采用铕标记技术，提供铕标记试剂盒，以提高方法的灵敏度及稳定性。

本发明的技术方案是：

人类免疫缺陷病毒HIV(1+2型)抗体时间分辨免疫荧光分析法，包括下列步骤：

①固相抗体制备：将HIV重组抗原用碳酸盐缓冲液稀释至1-10ug/mL作为包被液，包被反应板，形成固相抗体，并用封闭液(磷酸盐缓冲液及0.5％(W/V)的牛血清白蛋白(BSA))封闭；

②镧系元素离子标记抗原制备：选用配对HIV重组抗原用常规方法进行镧系元素离子标记；

③步骤①制得的具有固相抗体的反应板上，每孔加入HIV阴阳性对照或待测样品，以及用反应缓冲液稀释的标记抗原进行孵育，经荧光增强液解离后，最后进行荧光测定。

步骤①中包被液中单克隆抗体的浓度为1-10ug/mL，步骤②中配对HIV重组抗原需在反应缓冲液(pH 7.8的50mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)，内含0.9％NaCl，1％BSA，0.05％牛IgG，20uM EDTA，0.08％吐温(Tween)20和0.1％NaN₃(反应缓冲液组分％指的是W/V))以体积比为1∶21稀释。步骤②中的镧系元素离子优选为Eu³⁺。步骤③中反应缓冲液同②；且该步骤③在时间分辨荧光免疫分析仪器上自动完成。所用荧光增强液为β二酮体。

人类免疫缺陷病毒HIV(1+2型)抗体检测试剂盒，其特征是试剂盒包括：包被抗原的缓冲液(碳酸盐缓冲液)、封闭液(磷酸盐缓冲液及0.5％(W/V)BSA)、反应缓冲液(pH 7.8的50mmol/L Tris-HCl，内含0.9％NaCl，1％BSA，0.05％牛IgG，20uM EDTA，0.08％Tween20和0.1％NaN₃)、工作洗涤液(磷酸盐缓冲液)、荧光增强液，以及作为包被抗原的HIV重组抗体，镧系元素离子标记的HIV重组抗原。

本发明使用双抗原夹心法，反应步骤包括：试剂准备、加样反应、洗涤拍干、加增强液、测荧光值。

本发明的有益效果是：分析灵敏度高(符合或超过HIV国家参比品的要求)，检测时间短(100min)，特异性好，与干扰物质的交叉反应小。

附图说明：

图1为本发明的反应原理图