[发明专利]一种广谱性农药残留免疫检测试纸及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种广谱性农药残留免疫检测试纸，其特征在于：该试纸采用含有对多种有机磷和多种拟除虫菊酯类杀虫剂有特异性识别的单克隆或多克隆抗体的硝酸纤维素膜试纸。

2.如权利要求1所述的一种广谱性农药残留免疫检测试纸，其特征在于：所述的多种有机磷或多种拟除虫菊酯类杀虫剂有特异性识别的多克隆抗体是以有机磷或菊酯类农药通用结构为半抗原，通过活化酯法合成免疫原，免疫新西兰大白兔，当效价达最佳时，心脏采血，先用硫酸铵分步沉淀法初步纯化后，再经Sephadex G-200进一步纯化得到的高质量广谱性有机磷抗体或拟除虫菊酯抗体。

3.一种如权利要求1所述的广谱性农药残留免疫检测试纸的制备方法，其特征在于：其制备方法包括如下步骤：

1)首先采用由2×2块0.5cm×0.5cm大小的硝酸纤维素膜，并将其每块分别取名为A1，A2，B1和B2；

2)、然后将1μL有机磷包被液点滴于A1，A2中央，1μL拟除虫菊酯包被液点滴于B1，B2中央，下面垫吸水纸，4℃过夜，于PBST漂洗3次，晾干；

3)、再是将经过步骤2)处理后的4块硝酸纤维素膜分别浸在封闭液中浸泡30min，于PBST中漂洗3次，晾干；

4)、其次是将经过步骤3)处理后的A1、B1浸在有机磷抗体、拟除虫菊酯抗体和待测样品提取液的预混合液中；A2、B2浸在有机磷抗体、拟除虫菊酯抗体和阴性样品提取液的预混合液中，作为对照样，10min后于PBST中漂洗3次，晾干；

5)、然后再将经过步骤4)处理后的4块硝酸纤维素膜分别浸在酶标二抗稀释液中10min，于PBST中漂洗3次，晾干；

6)、再将经过步骤5)处理后的4块硝酸纤维素膜分别浸在底物反应液暗处反应5min，于PBST中漂洗3次，晾干；

7)、最后目测结果，A2、B2为阴性样品在硝酸纤维素膜上形成特异性褐色沉淀，而A1、B1为阳性样品在硝酸纤维素膜不显色或显浅褐色，A1，B1就制备成本发明检测用的试纸。

4.如权利要求3所述的一种广谱性农药残留免疫检测试纸的制备方法，其特征在于：所述的有机磷包被液是指二乙基膦酸乙酸与卵清蛋白偶联物的PBS稀释液，拟除虫菊酯包被液是指间苯氧基苯甲酸与卵清蛋白偶联物的PBS稀释液。

5.如权利要求3所述的一种广谱性农药残留免疫检测试纸的制备方法，其特征在于：所述的封闭液为1％卵清蛋白的PBS稀释液。

6.如权利要求3所述的一种广谱性农药残留免疫检测试纸的制备方法，其特征在于：所述的样品提取液是指于20g菜样中加乙腈30mL匀浆1min，抽滤后加5-7g氯化钠盐析，取其上清液为样品提取液，且与有机磷抗体和拟除虫菊酯抗体预混合10min后形成预混合液待测。

7.一种广谱性农药残留免疫检测试纸的应用，其特征在于：称取10g切碎的农作物样品，加乙腈30ml匀浆1min，抽滤后加5-7g氯化钠盐析，取其上清液为样品提取液，采用本发明的方法制备的广谱性的农药残留免疫检测试纸条的吸水纸端浸入样品液10s后取出后平放，10min后观察结果，如只有对照区显色，表示样品为阴性，若样品区条带显色，表明农作物样品中有机磷或菊酯类农药残留。