[发明专利]利用浓缩椰子水提高文心兰原球茎增殖及分化的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种文心兰原球茎增殖及分化方法，具体涉及一种通 过添加浓缩椰子水可明显地提高文心兰原球茎增殖及分化方法。

背景技术

兰花是一种以香著称的花卉，以其特有的叶、花、香独具四清(气 清、色清、神清、韵清)给人以极高洁、清雅的优美形象，古今名人 对它品价极高，被喻为花中君子。兰花种子发芽率低，时间长，而且 不整齐，使兰花的培育生产不能更好地满足市场的需求。目前，兰花 的种苗生产主要利用组织培养的技术方法，可有效地提高兰花良种的 快速繁殖系数。采用组织培养的方法，可周年规模化生产性状整齐- 致的种苗供生产上应用，但在组织培养过程中如何提高种苗的繁殖速 率一直是研究人员和生产企业关心的问题。组织培养中常用的有机添 加物如椰子水、香蕉和马铃薯等是一类含有氨基酸、激素和酶等有机 成分较为复杂的天然复合物。研究证明，它们对细胞和组织的增殖与 分化有明显的促进作用。在兰花的快速组织培养中曾多人尝试着通过 添加不同的有机物以达到此目的，刘晓燕等人通过添加不同的有机物 如椰乳、香蕉、马铃薯、苹果等对蝴蝶兰原球茎增殖效果进行了研究， 通过实验比较分析发现以椰乳的增殖效果最好。陈发菊等通过活性碳 和椰乳对文心兰离体芽尖培养的影响研究也表明对文心兰丛生芽的 分化具明显的促进作用。由此可见，椰子水可以作为完善植物组织培 养再生体系的添加剂使用。

由于组培中所需椰子水添加量较大，而目前，我国椰子来源仅限 于海南省，产地范围较小，且椰子果大，运输相当不便，因而组培工 厂获取椰子水的成本较高，不利于组培中椰子水的应用，制约了文心 兰组织培养的生产途径，而浓缩椰子水对植物组织培养过程的影响尚 未见有报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用浓缩椰子水提高文心兰原球茎增 殖及分化的方法，通过添加浓缩椰子水的方式显著提高文心兰原球茎 的增殖率，有效提高文心兰组培再生体系。

本发明所采用的技术方案：

一种利用浓缩椰子水提高文心兰原球茎增殖及分化的方法，由以 下步骤组成：

1、浓缩椰子水的制备

将椰子水置于旋转蒸发仪上浓缩10～15倍至椰子水的糖浓度为 40～60％得到浓缩椰子水，备用；旋转蒸发仪温度控制在50～80℃， 真空度-0.07～0.08MPa，转速为30～40转/min。

2、外植体材料的选择及原球茎的诱导

取文心兰植株茎尖洗净后，留长约2～3cm的幼芽，经无菌水冲 洗、酒精浸泡后，加入0.15％HgCl₂溶液进行灭菌，然后用无菌水冲 洗，滤纸吸干，剥取茎尖接种到诱导培养基上进行诱导培养，培养温 度24～28℃，PH5.8，光照度1500～2000lx，光照12小时/天。15天 后茎尖开始膨胀，23天后在茎尖基部出现了类似愈伤组织样的乳状 突起，一个月后可陆续产生原球茎。所述诱导培养基是以MS培养基 为基础培养基，并添加6-BA 4mg/L、NAA 0.5mg/L、30g/L蔗糖、 5.0g/L琼脂粉、1g/L活性炭和1％体积的浓缩椰子水。

3、原球茎增殖培养

将诱导产生的原球茎转接到增殖培养基上进行增殖培养，培养温 度24～28℃，光照度1500～2000lx下进行培养，光照12小时/天。 所述增殖培养基是以MS培养基为基础培养基，并添加6-BA 2mg/L、 NAA 0.5mg/L、30g/L蔗糖、5.0g/L琼脂粉、1.0g/L活性炭和0.5～ 4％体积的浓缩椰子水。

4、分化培养

从继代的原球茎中选取生长良好、翠绿色、结构较为致密的原球 茎转入分化培养基上进行分化培养。所述分化培养基是以1/2MS培养 基为基础培养基，并添加6-BA 0.5mg/L、+30g/L蔗糖、5.0g/L琼脂 粉、1.0g/L活性炭和1％体积的浓缩椰子水。原球茎在增大的同时，也 会发生少量增殖，4周左右原球茎开始分化出芽。

5、生根壮苗

将分化出的丛生芽切割成单个芽，接种在生根壮苗培养基上培养 至成苗。所述生根壮苗培养基是以1/2MS培养基为基础培养基，并 添加IBA 0.5mg/L、30g/L蔗糖、5.0g/L琼脂粉和1.0g/L活性炭。