[发明专利]基于多种益生菌发酵培养物的微生物复合制剂的制备方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种微生物复合制剂。具体地说是涉及一种基于多种益生菌的发酵培养物的复合微生物制剂及其应用。属于微生物制剂领域。

(二)背景技术

由于农药、化肥、抗生素和激素的大量使用给生态环境和农产品品质带来了日趋严重的影响。为此，需采用微生物制剂来改良生态环境。目前，已经上市的微生物制剂，大多是单一菌或简单的复合菌制剂，因而其功能都较为单一，用于种植业和养殖业时仅能针对肥料或饲料的一项或几项指标进行改良；在很多复合菌制剂的制备过程中，部分企业盲目的认为加入的菌的种类越多越好，而将互相拮抗菌放在了一起；有的由于菌种选用不当，或使用的培养基营养成分不均衡或，酸碱度、温度等关键性参数设定存在偏差，造成活菌含量低，杂菌多，水分含量偏高等问题，影响了产品的质量及其使用效果。

(三)发明内容

本发明的目的在于克服上述不足，提供一种功能多、制品中活菌数量高，成品保存期长的基于多种益生菌发酵培养物的微生物复合制剂的制备方法。

本发明的目的是这样实现的：一种基于多种益生菌发酵培养物的微生物复合制剂的制备方法，所述多种益生菌包括啤酒酵母菌(好氧菌)、枯草芽孢杆菌(厌氧菌)、嗜酸乳杆菌(兼性厌氧菌)、沼泽红假单胞菌(兼性厌氧菌)和菌粪肠球菌(兼性厌氧菌)，所述制备方法包括培养基的制备和发酵工艺：

一、培养基的制备

a)用于啤酒酵母菌(好氧菌)发酵的培养基

用于啤酒酵母发酵菌的培养基，包含以下重量配比的原料：蜂蜜50-200份、红糖300-900份、磷酸二氢钾1-5份、磷酸氢二钾1-5份、硫酸亚铁80-160份、硫酸锰5-20份、硫酸铜3-10份、硫酸锌8-20份、硼酸8-40份、钼酸铵0.5-1份和水5000-8000份；

b)用于嗜酸乳杆菌、沼泽红假单胞菌和粪肠球菌(兼性厌氧菌)发酵的培养基

用于嗜酸乳杆菌、沼泽红假单胞菌和粪肠球菌发酵的培养基包含以下重量配比的原料：蜂蜜50-200份、红糖300-900份、磷酸二氢钾1-5份、磷酸氢二钾1-5份、硫酸亚铁80-160份、硫酸锰5-20份、硫酸铜3-10份、硫酸锌8-20份、硼酸8-40份、钼酸铵0.5-1份和水5000-8000份；

c)用于啤酒酵母、嗜酸乳杆菌、沼泽红假单胞菌和粪肠球菌发酵后混合，再加入枯草芽孢杆菌菌种混合均匀后，再次发酵的培养基

用于啤酒酵母、嗜酸乳杆菌、沼泽红假单胞菌和粪肠球菌发酵后混合，再加入枯草芽孢杆菌菌种混合均匀后，再次发酵的培养基包含以下重量配比的原料：腐植酸钠3-8份，红糖50-90份，蜂蜜10-30份和水3000-5000份。

二、发酵工艺

a)啤酒酵母(好氧菌)发酵

按所述配方将蜂蜜、红糖、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸铜、硫酸锌、硼酸、钼酸铵和水置入发酵罐中，85℃-95℃灭菌30-40分钟后待温度降至30-35℃时，加入啤酒酵母菌种，充分搅拌40-60分钟，将温度控制在30-40℃，发酵36-48小时，得啤酒酵母菌培养物，所述啤酒酵母菌种的加入量占其培养基总量的重量百分比为0.1％-0.5％；

b)嗜酸乳杆菌、沼泽红假单胞菌和粪肠球菌(兼性厌氧菌)的发酵

按所述配方将蜂蜜、红糖、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸铜、硫酸锌、硼酸、钼酸铵和水置入发酵罐中，85℃-95℃灭菌30-40分钟后待温度降至30-35℃时，加入嗜酸乳杆菌、沼泽红假单胞菌和粪肠球菌，充分搅拌40-60分钟，将温度控制在25-35℃，发酵36-48小时，得嗜酸乳杆菌培养物、沼泽红假单胞菌培养物和粪肠球菌培养物，所述嗜酸乳杆菌、沼泽红假单胞菌和粪肠球菌的加入量占其培养基总量的重量百分比分别为0.05％-0.4％、0.01％-0.2％和0.1％-0.5％；

c)枯草芽孢杆菌(厌氧菌)的发酵

按所述配方将腐植酸钠、红糖、蜂蜜和水置入发酵罐中，加入碳酸氢钠调节pH为7-7.5，加热至温度为85-95℃灭菌30-40分钟，后待温度降至30-35℃时，加入所述发酵工艺a)和b)的培养物的混合物，再加入枯草芽孢杆菌菌种，搅拌后温度控制在30-40℃，将发酵罐中大气压抽负压至0.1-0.3个大气压，发酵72-96小时得到成品。其中所述枯草芽孢杆菌的加入量占所述用于啤酒酵母、嗜酸乳杆菌、沼泽红假单胞菌和粪肠球菌发酵后混合，再加入枯草芽孢杆菌菌种混合均匀后，再次发酵的培养基总量的重量百分比分别为0.01％-0.05％。