[发明专利]基于多种益生菌发酵培养物的微生物复合制剂的制备方法

权利要求书

1.一种基于多种益生菌发酵培养物的微生物复合制剂的制备方法，其特征在于所述多种益生菌包括啤酒酵母菌、枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆、沼泽红假单胞菌和菌粪肠球菌，所述制备方法包括培养基的制备和发酵工艺：

一、培养基的制备

a)用于啤酒酵母菌发酵的培养基

用于啤酒酵母发酵菌的培养基，包含以下重量配比的原料：蜂蜜50-200份、红糖300-900份、磷酸二氢钾1-5份、磷酸氢二钾1-5份、硫酸亚铁80-160份、硫酸锰5-20份、硫酸铜3-10份、硫酸锌8-20份、硼酸8-40份、钼酸铵0.5-1份和水5000-8000份；

b)用于嗜酸乳杆菌、沼泽红假单胞菌和粪肠球菌发酵的培养基

用于嗜酸乳杆菌、沼泽红假单胞菌和粪肠球菌发酵的培养基包含以下重量配比的原料：蜂蜜50-200份、红糖300-900份、磷酸二氢钾1-5份、磷酸氢二钾1-5份、硫酸亚铁80-160份、硫酸锰5-20份、硫酸铜3-10份、硫酸锌8-20份、硼酸8-40份、钼酸铵0.5-1份和水5000-8000份；

c)用于啤酒酵母、嗜酸乳杆菌、沼泽红假单胞菌和粪肠球菌发酵后混合，再加入枯草芽孢杆菌菌种混合均匀后，再次发酵的培养基

用于啤酒酵母、嗜酸乳杆菌、沼泽红假单胞菌和粪肠球菌发酵后混合，再加入枯草芽孢杆菌菌种混合均匀后，再次发酵的培养基包含以下重量配比的原料：腐植酸钠3-8份，红糖50-90份，蜂蜜10-30份和水3000-5000份，

二、发酵工艺

a)啤酒酵母发酵

按所述配方将蜂蜜、红糖、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸铜、硫酸锌、硼酸、钼酸铵和水置入发酵罐中，85℃-95℃灭菌30-40分钟后待温度降至30-35℃时，加入啤酒酵母菌种，充分搅拌40-60分钟，将温度控制在30-40℃，发酵36-48小时，得啤酒酵母菌培养物，所述啤酒酵母菌种的加入量占其培养基总量的重量百分比为0.1％-0.5％；

b)嗜酸乳杆菌、沼泽红假单胞菌和粪肠球菌的发酵

按所述配方将蜂蜜、红糖、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸铜、硫酸锌、硼酸、钼酸铵和水置入发酵罐中，85℃-95℃灭菌30-40分钟后待温度降至30-35℃时，加入嗜酸乳杆菌、沼泽红假单胞菌和粪肠球菌，充分搅拌40-60分钟，将温度控制在25-35℃，发酵36-48小时，得嗜酸乳杆菌培养物、沼泽红假单胞菌培养物和粪肠球菌培养物，所述嗜酸乳杆菌、沼泽红假单胞菌和粪肠球菌的加入量占其培养基总量的重量百分比分别为0.05％-0.4％、0.01％-0.2％和0.1％-0.5％；

c)枯草芽孢杆菌的发酵

按所述配方将腐植酸钠、红糖、蜂蜜和水置入发酵罐中，加入碳酸氢钠调节pH为7-7.5，加热至温度为85-95℃灭菌30-40分钟，后待温度降至30-35℃时，加入所述发酵工艺a)和b)的培养物的混合物，再加入枯草芽孢杆菌菌种，搅拌后温度控制在30-40℃，将发酵罐中大气压抽负压至0.1-0.3个大气压，发酵72-96小时得到成品，其中所述枯草芽孢杆菌的加入量占所述用于啤酒酵母、嗜酸乳杆菌、沼泽红假单胞菌和粪肠球菌发酵后混合，再加入枯草芽孢杆菌菌种混合均匀后，再次发酵的培养基总量的重量百分比分别为0.01％-0.05％，

所述粪肠球菌、枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、沼泽红假单胞菌和啤酒酵母五种益生菌发酵的菌种的重量配比为：1∶0.8-2.5∶0.8-1.2∶0.8-3.5∶1.5-3.0。