[发明专利]一种制备去氧鬼臼毒素的方法

权利要求书

1.一种制备去氧鬼臼毒素的方法，包括如下步骤：

1)将桃耳七粉碎成桃耳七粉末，进行冷浸、渗漉或回流提取，得到桃耳七提取 液；

2)浓缩所述步骤1)得到的桃耳七提取液后，得到所述桃耳七提取液的浓缩液， 与硅胶混匀、干燥、研细后，装填于色谱柱中；所述色谱柱中已装有柱层析用空白硅 胶；与所述桃耳七提取液的浓缩液混匀所用硅胶与所述柱层析用空白硅胶为同种硅胶；

所述色谱柱中，已装填有柱层析用空白硅胶，所述柱层析用空白硅胶的用量为所 述桃耳七原料干重的10％～40％；所述色谱柱的径高比为1∶0.5～1∶5；

3)用洗脱液对所述色谱柱进行洗脱，以与所述色谱柱中空白硅胶柱体积相等的 流出液为1个流分，收集含有去养鬼臼毒素的流分，再除去所述含有去氧鬼臼毒素的 流分中的洗脱液，用二氯甲烷或三氯甲烷溶解残留物，重结晶，得到所述去氧鬼臼毒 素；

所述步骤3)中，洗脱液选自下述四种混合液中的任意一种：石油醚与酯组成的 混合液、石油醚与含氯烷烃组成的混合液、己烷与酯组成的混合液和己烷与含氯烷烃 组成的混合液；所述石油醚为沸程为30～60℃的石油醚或沸程为60～90℃的石油醚， 所述己烷为环己烷或正己烷，所述酯为乙酸乙酯、甲酸乙酯或甲酸丁酯，所述含氯烷 烃为二氯甲烷或三氯甲烷；所述重结晶步骤中，溶剂为甲醇或乙醇。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述桃耳七粉末 的目数为10-60目，所述提取步骤中，所用溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二 氯甲烷或三氯甲烷。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述桃耳七粉末 的目数为10-20目。

4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述硅胶 的目数为100目～200目或200目～300目。

5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：所述洗脱液为下述三种洗脱 液中的任意一种：由沸程为60～90℃的石油醚与甲酸丁酯组成的混合液、由正己烷与 二氯甲烷组成的混合液和由环己烷与乙酸乙酯组成的混合液。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述洗脱液为下述三种洗脱液中 的任意一种：由沸程为60～90℃的石油醚与甲酸丁酯以体积比为65∶35混合的混合液、 由正己烷与二氯甲烷以体积比为80∶20混合的混合液和由环己烷与乙酸乙酯以体积比 为75∶25混合的混合液。

7.根据权利要求1-6任一所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述桃耳 七提取液的浓缩液中，每毫升所述桃耳七提取液的浓缩液中含有所述桃耳七原料的干 重为2g～10g，所述硅胶的用量为所述桃耳七原料干重的5％～15％。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述桃耳七提取 液的浓缩液中，每毫升所述桃耳七提取液的浓缩液中含有所述桃耳七原料的干重为 10g，所述硅胶的用量为所述桃耳七原料干重的10％，所述色谱柱中，已装填有柱层 析用空白硅胶，所述柱层析用空白硅胶的用量为所述桃耳七原料干重的10-20％；所述 色谱柱的径高比为1∶2～1∶4。

9.根据权利要求5-8任一所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，所述石油 醚与酯组成的混合液和所述石油醚与含氯烷烃组成的混合液中，所述石油醚的体积百 分比为15％～50％；所述己烷与酯组成的混合液和己烷与含氯烷烃组成的混合液中，所 述己烷的体积百分比为15％～50％。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，所述石油醚与 酯组成的混合液和所述石油醚与含氯烷烃组成的混合液中，所述石油醚的体积百分比 为25％-40％；所述己烷与酯组成的混合液和己烷与含氯烷烃组成的混合液中，所述己 烷的体积百分比为25％-40％。

11.根据权利要求1-10任一所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述冷 浸法包括如下步骤：将所述桃耳七粉末浸泡于溶剂中，滤过取滤液，将滤渣再浸泡于 溶剂中，滤过取滤液，将所述两次滤过得到的滤液合并，得到所述桃耳七提取液；所 述溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷或三氯甲烷，每次浸泡时间均为1 小时-48小时，浸泡的温度为16℃-35℃；

所述渗漉法包括如下步骤：将所述桃耳七粉末浸润于溶剂后，装入底部装有脱脂 棉的渗漉器中，并向所述渗漉器中加入溶剂，使所述渗漉器中的溶剂液面高出所述桃 耳七粉末面5厘米-15厘米，放置12小时-48小时后，收集渗漉液，得到所述桃耳七 提取液；所述溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷或三氯甲烷；

所述回流提取法包括如下步骤：将所述桃耳七粉末于溶剂中进行回流，回流完毕 后滤过，将所述滤过步骤得到的滤渣用溶剂再进行回流，回流完毕后再滤过，合并两 次滤过得到的滤液，得到所述桃耳七提取液；所述溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙 酯、二氯甲烷或三氯甲烷。