[发明专利]油菜茎基溃疡病菌的实时荧光PCR检测方法及检测用引物和探针

权利要求书

1.一种油菜茎基溃疡病菌的实时荧光PCR检测方法，其特征在于， 包括如下步骤：

(1)设计引物和探针；

该引物的序列为：

Lmb3：5’-caccaattggatccccta-3’(SEQ ID NO.1)或其互补链；

R2：5’-ggcgcaaaatgtgctgcgct-3’(SEQ ID NO.2)或其互补链；

该探针的序列为：

Probe-M：5’-FAM-cacttgggactcgccttg-MGB-3’(SEQ ID NO.3)或其 互补链；

(2)对油菜籽样品进行过筛处理，然后收集油菜茎基溃疡病菌菌株的 菌丝并提取DNA；所述对油菜籽样品进行过筛处理具体为：用孔径2.5mm 和1.5mm的网筛过筛，取筛上物和筛下物，液氮研磨后取样提取DNA； 所述收集油菜茎基溃疡病菌菌株的菌丝并提取DNA具体为：菌株用PDA 培养基繁殖后收集菌丝，液氮研磨后取菌丝粉，用植物基因组提取试剂盒 提取DNA；

(3)采用步骤(1)设计的引物和探针进行实时荧光PCR检测。

2.如权利要求1所述的油菜茎基溃疡病菌的实时荧光PCR检测方法， 其特征在于，步骤(3)中，所述实时荧光PCR检测的反应体系为25μL， 包括12.5μL2×Premix Ex Taq、5μM步骤(1)设计的引物和探针各1μL、 1μL模板DNA、0.5μL 50×ROX Reference Dye II、加无菌水补至25μL。

3.如权利要求1或2所述的油菜茎基溃疡病菌的实时荧光PCR检测 方法，其特征在于，步骤(3)中，所述实时荧光PCR检测的反应程序为： 95℃预变性10s，然后以95℃15s，60℃1min进行40个循环。

4.一种用于检测油菜茎基溃疡病菌的引物，其特征在于，其序列为：

Lmb3：5’-caccaattggatccccta-3’(SEQ ID NO.1)或其互补链；

R2：5’-ggcgcaaaatgtgctgcgct-3’(SEQ ID NO.2)或其互补链。

5.一种用于检测油菜茎基溃疡病菌的探针，其特征在于，其序列为： Probe-M：5’-FAM-cacttgggactcgccttg-MGB-3’(SEQ ID NO.3)或其互补 链。