[发明专利]一种转基因水稻品系的外源插入片段的旁侧序列

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种生物技术领域的基因序列，具体的说，涉及一种转基因水稻品系浙粳22Bt的外源插入片段的旁侧序列。

背景技术

水稻是我国最重要的粮食作物之一，随着转基因技术在水稻中的广泛研究和应用，已经有多个转基因水稻品系批准环境释放，两个批准进行生产性试验。对转基因植物进行转化事件特异性的检测是对转基因植物进行监督管理，保障其健康发展的重要技术基础。而转基因植物的外源插入片段的旁侧序列是转基因植物品系最重要的分子特征之一，因此，外源插入片段的旁侧序列是建立转基因植物转化事件特异性检测方法的重要技术资料。

目前已经有部分专利和文献报道了转基因植物外源插入载体旁侧序列，如：彭于发等人于2007年利用Genome walking方法分析了转基因水稻品系科丰6号的外源插入片段的旁侧序列，建立了转基因科丰6号水稻的品系特异性检测方法。转基因水稻浙粳22Bt抗虫性好，抗虫蛋白只在叶片中表达，且已申请进行环境释放试验，具有较好的发展应用前景。然而，在对现有的专利和文献的分析中发现，还没有任何关于转基因水稻品系浙粳22Bt的外源插入片段的旁侧序列的文章和专利报道。

发明内容

本发明的目的在于针对上述领域中的空白，提供了一种转基因水稻品系浙粳22Bt的外源插入片段的旁侧序列。

本发明的另一目的在于还提供该转基因品系特异性的PCR检测方法。

本发明采用如下技术方案：

一种转基因水稻品系浙粳22Bt的外源插入片段的旁侧序列，所述旁侧序列为5’端旁侧序列，5’端旁侧序列如SEQ ID NO1所示。

一种转基因水稻品系浙粳22Bt的外源插入片段的旁侧序列，所述旁侧序列为3’端旁侧序列，3’端旁侧序列如SEQ ID NO2所示。

所述的旁侧序列是通过Tail-PCR和LD-PCR扩增得到。

本发明还公开一种转基因水稻品系浙粳22Bt的外源插入片段的旁侧序列的定性PCR检测方法，所述PCR反应中的两条引物组合为权利要求1所述旁侧序列的特异性引物：一条引物为依据SEQ ID NO1中1-423位序列设计的正向引物，另一条引物为依据SEQ ID NO1的424-481位序列设计的反向引物。

所述的一种转基因水稻品系浙粳22Bt的外源插入片段的旁侧序列的定性PCR检测方法，所述正向引物为ZJ22Bt-LB-1F：5-TCCAGTCGGGAAACTTGTCGT-3’；所述反向引物为ZJ22Bt-LB-1R：5’TCTCCTAGAGGCTGACATGTG-3’。

一种转基因水稻品系浙粳22Bt的外源插入片段的旁侧序列的定性PCR检测方法，所述PCR反应中的两条引物组合为权利要求2所述旁侧序列的特异性引物：一条引物依据SEQ ID NO2中1-180位序列设计的正向引物，另一条引物依据SEQ ID NO2的181-560位序列设计的反向引物。

所述正向序列为ZJ22Bt-RB-2F：5’ACAGTTGCGCAGCCTGAATGG-3’；所述反向序列为ZJ22Bt-RB-2R：5’CTGTTGCATGCACACGGATGG-3’。