[发明专利]复合检测禽流感和新城疫病毒的试剂盒及检验方法

权利要求书

1.复合检测禽流感和新城疫病毒的试剂盒，其特征在于该试剂盒包括以下组分：

1)裂解液：100％Trizol；

2)RT-PCR反应液：内含浓度为25mmol/L MgCl₂，10mmol/L dNTP Mixture；

3)引物及探针混合液；检测禽流感病毒上下游引物和检测新城疫病毒上下游引物按终 浓度为20pmol/L等比例混合，检测禽流感病毒探针和新城疫病毒探针按终浓度为 10pmol/L等比例混合；

其中所涉及的检测H5、H7和H9亚型禽流感病毒的引物及探针序列为：

禽流感病毒上游引物：5’-CGGACGAAAAGGCAACGA-3’；

禽流感病毒下游引物：5’-CATTGTCTCCGAAGAAATAAGATCCT-3’；

禽流感病毒探针：JOE-CGATCGTGCCCTCCTTTGACATGAGT-TAMRA；

检测新城疫病毒中强毒的引物及探针序列为：

新城疫病毒上游引物：5’-TGCTCACTCCTCTTGGYGAT-3’

新城疫病毒下游引物：5’-TGCTGTTAYCTGTGCCGCHG-3’

新城疫病毒探针FAM-CACCTATAAAGCGTTTYTGTCTCCTTCCTCC-TAMRA

其中Y代表嘧啶，此处为T或C，H代表嘌呤和嘧啶，此处为A或C或T；

4)酶混合物：浓度均为5U/μL的AMV反转录酶与Taq酶按1；1比例混匀分装；

5)DEPC水：内含浓度为1‰的焦炭酸二乙酯；

6)阴性对照：灭活尿囊液，采自孵育至9日龄的SPF鸡胚，无菌抽取其鸡胚尿囊液， 60℃作用1小时灭活制备；

7)阳性对照：利用AIV NP基因保守区和NDV F基因裂解位点区构建的cDNA质粒。