[发明专利]异戊酰螺旋霉素III的分离制备及其应用

权利要求书

1.异戊酰螺旋霉素III的分离方法，其特征是，步骤如下：

1)、粗分离：首先从可利霉素样品中对异戊酰螺旋霉素III组分进行粗分离， 采用硅胶柱层析方法，以乙酸乙酯和甲醇作为洗脱剂，分别采用三倍柱体积乙酸 乙酯∶甲醇＝3∶1和三至五倍柱体积乙酸乙酯∶甲醇＝1∶1进行洗脱，收集乙酸 乙酯∶甲醇＝1∶1部分，将收集液浓缩至干，获得异戊酰螺旋霉素I、II、III组 分，用于进一步纯化分离；

2)、高效纯化：采用制备型高效液相色谱对粗分离样品进行纯化，以ODS 作为色谱填料，用乙腈和醋酸氨缓冲液进行梯度洗脱，通过紫外检测，记录分离 的紫外谱图，并对异戊酰螺旋霉素III目标峰进行收集；

具体色谱条件如下：仪器：工业级制备色谱，主要部件包括二元梯度泵，紫 外检测器和色谱工作站；色谱柱：ODS制备色谱柱，型号为70i.d.×380mm，10μ； 流动相A：乙腈25％，流动相B：100mM NH₄Ac水溶液75％，流速：260mL/min； 进样量：10mL；进样浓度：0.5g/mL；检测波长：231nm；

收集方式：紫外触发收集；按照异戊酰螺旋霉素III的保留时间，RT 48.009，收 集样品，异戊酰螺旋霉素III高压液相色谱图见图1；

3)、样品后处理：收集的异戊酰螺旋霉素III样品，采用旋转蒸发除去乙腈， 然后用1倍量乙酸乙酯萃取，用旋转蒸发除去萃取液中乙酸乙酯，得膏状样品， 用石油醚重溶所得样品，再用旋转蒸发除去石油醚，获得异戊酰螺旋霉素III白 色粉末状固体。