[发明专利]一种新的miRNA检测技术及其应用

权利要求书

1.设计Oligod(T)/特异序列复合RT引物，可与miRNA有效结合，在Oligod(T)n的3’端有1-2个碱基的锚定碱基与成熟miRNA序列匹配。

2.以合成的特异性MGB荧光探针代替传统的Taqman探针及非特异性荧光染料SYBRGREEN等，以缩小探针长度，同时具有高度的灵敏度和特异性，探针的特异序列根据miRNA的序列信息设计。

3.根据miRNA序列信息设计特异上游引物(Forward Primer)，根据Oligod(T)/特异序列复合RT引物的序列信息设计通用下游引物(Reverse Primer)，Tm值尽量保证在60℃。

4.技术方法主要内容包括利用RNA加尾和引物延伸法在miRNA用PolyA聚合酶处理后，用Oligod(T)/特异序列复合引物进行延伸得到反转录cDNA，然后用上、下游引物及MGB探针法进行real-time PCR扩增、检测miRNA。

5.含有权利要求1、2、3、4中的技术、方法所制备的单种或多种试剂及试剂组合物以及试剂盒，进行miRNA检测以用于基础研究和/或临床应用。