[发明专利]猪链球菌毒力因子的多重PCR检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种猪链球菌毒力因子的多重PCR检测试剂盒，其特征在于，包含如下组分：2×PCR核心试剂预混物，猪链球菌2、7、9型阳性对照DNA，DL2000分子量参照溶液，ddH₂O和如下10种引物对：

引物对1：

碱基序列如SEQ ID NO：1所示的上游引物，

碱基序列如SEQ ID NO：2所示的下游引物；

引物对2：

碱基序列如SEQ ID NO：3所示的上游引物，

碱基序列如SEQ ID NO：4所示的下游引物；

引物对3：

碱基序列如SEQ ID NO：5所示的上游引物，

碱基序列如SEQ ID NO：6所示的下游引物；

引物对4：

碱基序列如SEQ ID NO：7所示的上游引物，

碱基序列如SEQ ID NO：8所示的下游引物；

引物对5：

碱基序列如SEQ ID NO：9所示的上游引物，

碱基序列如SEQ ID NO：10所示的下游引物；

引物对6：

碱基序列如SEQ ID NO：11所示的上游引物，

碱基序列如SEQ ID NO：12所示的下游引物；

引物对7：

碱基序列如SEQ ID NO：13所示的上游引物，

碱基序列如SEQ ID NO：14所示的下游引物；

引物对8：

碱基序列如SEQ ID NO：15所示的上游引物，

碱基序列如SEQ ID NO：16所示的下游引物；

引物对9：

碱基序列如SEQ ID NO：17所示的上游引物，

碱基序列如SEQ ID NO：18所示的下游引物；

引物对10：

碱基序列如SEQ ID NO：19所示的上游引物，

碱基序列如SEQ ID NO：20所示的下游引物。

2.一种根据权利要求1所述的猪链球菌毒力因子的多重PCR检测试剂盒的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，提供待测样品的DNA；

步骤二，取试剂盒，采用常规PCR方法扩增待测样品的DNA，采用琼脂糖凝胶电泳法检测扩增结果，根据结果进行判定；

所述根据结果进行判定具体为，以猪链球菌2型阳性DNA作为对照，若对照未扩增出以下全部条带，则重新检测；若对照扩增出以下全部条带，则判定如下：

若扩增出387bp和688bp，则gdh和cps2J阳性，为猪链球菌2型，

若扩增出251bp和688bp，则gdh和cps7H阳性，为猪链球菌7型，

若扩增出507bp和688bp，则gdh和cps9D阳性，为猪链球菌9型，

若扩增出316bp，则mrp阳性，

若扩增出626bp，则epf阳性，

若扩增出720bp，则fbps阳性，

若扩增出571bp，则gapdh阳性，

若扩增出858bp，则orf2阳性，

若扩增出443bp，则sly阳性；

无对应条带，则判断为阴性。

3.根据权利要求2所述的猪链球菌毒力因子的多重PCR检测试剂盒的检测方法，其特征是，所述PCR方法中扩增参数具体为：95℃5min，94℃30s，56℃30s，72℃40s，36个循环，72℃8min。